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M13 噬菌体衣壳蛋白改造在改良噬菌体展示技

2019.9.13

  • M13 噬菌体衣壳蛋白改造在改良噬菌体展示技术中的应用

           

实验材料

羧苄青霉素 氯霉素 大肠杆菌 CJ236

试剂、试剂盒

生理磷酸缓冲液 超纯甘油 PBS-T 缓冲液 PBS-T-BSA 缓冲液

仪器、耗材

2YT 培养基 SOC 培养基

实验步骤

下述方法描述了 P8 库的设计(见 12.3.1)、构建(见 12.3.2 )、选择(见 12.3.3.1 ) 和筛选(见 12.3.3.2),依此来鉴定能改进蛋白质表达水平的突变体。我们描述了利用前述噬菌粒—— pS1607 改进 hGH 表达水平的方案。这一方法也适用于任何其他靶蛋白。唯一的改变就是用表达靶蛋白的噬菌体粒取代 pS1607 以及用高亲和性
的靶蛋白配体取代 hGH 结合蛋白。

3.1 库的设计

我们前面已经提及在噬菌粒表达系统中 P8 的 N 端部分极度耐受突变,其中有些突变能增加异源融合蛋白的展示水平 [ 10,11 ]。随后,我们发现 P8 的 N 端只有 6 个野生型残基侧链(Ala 7、Ala 9、Ala 10、Phe11、Leu14 和 Ala18 ) 对


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