RNA比色法定量检测试剂盒使用说明
主要用途
YIJI RNA比色法定量检测试剂是一种旨在通过对溴苯肼与RNA的特异性结合反应，借助可见光波长的吸光峰值的变化，比色测定样品中RNA的绝对含量或浓度的技术方法。其适用于各种原核生物和真核生物的细胞或组织RNA以及环境中RNA含量分析。产品即到即用，性能稳定，简易方便，无需样品纯化，定量准确。
技术背景
对溴苯肼（p-bromophenylhydrazine；PBPH）具有与RNA酸性水解去嘌呤化（depurinated）的磷酸核糖（ribosephosphate），再去磷酸和脱水产生的糠醛（furfural），通过酸化溶剂萃取后，进行特异性反应，形成稳定、可重复性的黄色复合物。同时有效限制了与DNA释放的脱氧核糖 （deoxyribose），以及样本中糖原、甲基糖苷（methyl glucoside）、果糖（levulose）、葡萄糖（dextrose）等单糖分子发生反应产生的干扰。对溴苯肼方法较之苔黑酚（orcinol）反应更为特异。通过可见光（450nm）吸收进行定量分析RNA。
产品内容
YIJI水解液（Reagent A） 毫升
YIJI酸化液（Reagent B） 毫升
YIJI萃取液（Reagent C） 毫升
YIJI反应液（Reagent D） 毫升
YIJI稳定液（Reagent E） 毫升
YIJI标准液（Reagent F） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存YIJI标准液（Reagent F）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；试剂具有强力腐蚀性，注意操作安全，且避免光照，有效保证6月
用户自备
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
干式恒温仪或电热炉：用于反应物孵育
台式离心机：用于样品操作
3毫升玻璃比色皿：用于比色分析的容器
分光光度仪：用于样品比色测定
实验步骤
测定准备
准备好待测样品，置于冰槽里
设定好分光光度仪：波长450nm，并置零
准备好6个1.5毫升离心管，标记为1至6号管
按照下表配制标准液
放进冰槽里备用，避免光照
管号 | YIJI水解液（Reagent A） | YIJI标准液（Reagent F） | 标准RNA浓度 |
1 | 0 | xx毫升 | xx微克 |
2 | xx微升 | xx微升1号管 | xx微克 |
3 | xx微升 | xx微升2号管 | xx微克 |
4 | xx微升 | xx微升3号管 | xx微克 |
5 | xx微升 | xx微升4号管 | xx微克 |
6 | xx微升 | 0 | 0 |
二、比色测定
准备至少7个新的15毫升锥形离心管作为测定管：标记6个标准管和1个待测样品管
分别加入xx微升上述配制的YIJI标准液（Reagent F）到相应标准测定管里（注意：浓度和管号对号入座）
加入500微升待测样品到样品测定管里
分别加入xx微升YIJI水解液（Reagent A），混匀
煮沸30分钟或放进100℃干式恒温仪孵育60分钟（注意：小心加热过程中盖子打开）
在室温下静置，直至试管温度降温到室温（15至30分钟）
分别加入xx毫升YIJI酸化液（Reagent B）到所有测定管里
分别加入xx毫升YIJI萃取液（Reagent C）
煮沸60分钟或放进100℃干式恒温仪孵育3小时（注意：小心加热过程中盖子打开）
在室温下静置，直至试管温度降温到室温（15至30分钟）
分别加入xx毫升YIJI萃取液（Reagent C）
涡旋震荡15秒
放进台式离心机离心15分钟，速度为10000g
小心移取1毫升上层液相液体到新的15毫升锥形离心管
加入xx毫升YIJI反应液（Reagent D），混匀
室温下孵育1小时，避免光照
加入xx毫升YIJI稳定液（Reagent E），混匀
转移到3毫升玻璃比色皿
放进分光光度仪读数：获得吸光读数
构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光单位（OD）；横座标（X轴）为标准RNA含量（微克）
根据标准曲线获得样品对应RNA浓度（微克）
样品实际RNA浓度：
注意事项
本产品为10次样本操作
本产品检测范围在9至150微克
操作时，须戴手套
系统操作时，标准样品测定只需1次
试剂具有腐蚀性，严格注意操作安全
待测样品无需纯化，包括去蛋白、去糖、去DNA等处理
计算实际浓度时，不要忘记待测样品的稀释倍数
使用无水乙醇清洗比色皿
本公司提供系列生物大分子定量分析试剂产品
质量标准
本产品经鉴定性能稳定
本产品经鉴定定量准确
