纯化线粒体磷氧比(ADP/O)定量检测试剂盒使用说明
主要用途
纯化线粒体磷氧比(ADP/O)定量检测试剂是一种旨在通过极谱法检测系统(polarographic system)测定新鲜活体线粒体在已知浓度ADP存在(III态呼吸)的情况下氧浓度的降低,来分析磷氧比(P:O ratio),以评价线粒体呼吸链和氧化磷酸化偶联程度,即能量转化效率的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。可以被用于线粒体生理功能和药物作用机制等的研究。产品严格无菌,即到即用,操作简易,活体检测,性能稳定。
技术背景
线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体,即线粒体的呼吸耗氧偶联着ADP与Pi合成ATP的磷酸化反应。线粒体每吸收一克原子氧的同时,生长ATP(ADP磷酸化)的克分子数的比值,为ADP/O值。线粒体的磷氧比直接表征线粒体呼吸耗氧和ATP合成的关系。正常线粒体的ADP/O(P/O)为1.5:磷氧比降低意味着线粒体解偶联;磷氧比增高意味着线粒体偶联良好。其最大值为3.3。
产品内容
介质液(Reagent A) 毫升
底物液(Reagent B) 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存在-20℃冰箱里,有效保证6月
用户自备
CLARK氧电极仪:用于测定溶解氧浓度
实验步骤
实验开始前,制备好新鲜的线粒体置于冰槽里备用;同时将-20℃冰箱里的试剂融化,并预热氧电极仪到25℃。然后进行下列操作。
加入xx毫升介质液(Reagent A)到反应玻璃槽
使用微型磁力子搅拌,充分混匀
密封反应槽
开始记录氧浓度:起始饱和氧浓度值为0.240微摩尔分子氧/毫升(25℃)
持续记录1分钟后,注射加入20微升待测的线粒体(总量2毫克)(注意:氧浓度可能瞬时变化)
持续记录1分钟后,注射加入xx微升 底物液(Reagent B)(注意:氧浓度在10秒钟内开始下滑;参见注意事项9)
持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点
继续注射加入xx微升 底物液(Reagent B)(注意:氧浓度在10秒钟内开始下滑)
持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点
测算氧浓度降低值(微摩尔/毫升):
计算ADP/O:
注意事项
本产品为20次操作
操作时,须戴手套
确保反应玻璃槽洁净,密闭,以免氧气流入
线粒体样品须新鲜制备,建议不要冻存;制备的线粒体膜须完整,非常重要;建议使用线粒体分离试剂盒-YIJI10006.1
注射加入反应槽时,避免气泡和空气注入
避免乙醇污染;乙醇增加氧浓度;如果底物或抑制剂须使用乙醇溶解,则加注10微升
保持反应槽温度恒定,温度降低,氧浓度升高
反应液充分混匀,和环境氧保持平衡
加注 底物液(Reagent B)前,须充分冻融和混匀
严格按照规定加注试剂,切莫增加加注试剂容量
氧浓度百分值转换为微摩尔/毫升:
公式=【测定值(百分值)÷20.9%(环境标准氧百分值)】X 0.237(系数;微摩尔/毫升)