GST融合蛋白同位素（[γ32P]ATP）激酶标记试剂盒使用说明
主要用途
YIJI GST融合蛋白同位素（[γ32P]ATP）激酶标记试剂是一种旨在使用同位素（[γ32P]ATP）和cAMP依赖性蛋白激酶A（protein kinase K），标记纯化的目标融合蛋白，成为敏感探针的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种GST融合的重组蛋白。其应用于后续远西方杂交（FAR WESTERN BLOT） 印迹实验和印迹覆膜结合（BLOT OVERLAY BINDING）实验等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，反应敏感，重复性好。
技术背景
谷胱甘肽-S-转移酶（glutathione-S-transferase；GST）融合蛋白（fusion protein）的技术，广泛应用于蛋白与蛋白之间相互作用的研究、抗体的制造和纯化、以及生化分析。基于GST融合蛋白由GSTmoietry、蛋白酶切离部位和已知激酶磷酸化部位构成，使用同位素（[γ32P]ATP）和cAMP依赖性蛋白激酶A（protein kinase K），标记纯化的目标融合蛋白，作为敏感的探针，在远西方杂交（FAR WESTERN BLOT） 印迹实验或印迹覆膜结合（BLOT OVERLAY BINDING）实验中，探测和分析结合蛋白或多肽结构域。GST融合蛋白同位素（[γ32P]ATP）激酶标记是蛋白组学研究的常用工具。
产品内容
YIJI缓冲液（Reagent A） 毫升
YIJI标记液（Reagent B） 微升（用户自备）
YIJI反应液（Reagent C） 微升
YIJI酶促液（Reagent D） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里；有效保证6月
用户自备
[γ32P]ATP 同位素：用于同位素标记
1.5毫升离心管：用于样品反应操作和保存的容器
干式恒温仪：用于标记孵育
液体闪烁计数器（liquid scintillation counter）：用于同位素活性测定
实验步骤
准备好纯化的GST融合蛋白
移取xx微升YIJI缓冲液（Reagent A）到1.5毫升离心管
加入2.5微升用户自备的GST融合蛋白（总量为10微克）
加入xx微升YIJI标记液（Reagent B）（注意：同位素总量为10毫居里/毫升；5000居里/毫摩尔）
加入xx微升YIJI反应液（Reagent C）
加入xx微升YIJI酶促液（Reagent D）
枪头上下抽吸混匀
放进30℃干式恒温仪孵育30分钟
放进-70℃保存或置于冰槽里备用
或使用5至10微升（107CPM）标记蛋白继续后续远西方杂交（FAR WESTERN BLOT） 印迹实验和印迹覆膜结合（BLOT OVERLAY BINDING）实验等
注意事项
本产品为20次操作
本产品的标记效率可达60%以上
操作时，须戴手套
操作时，严格无菌
同位素操作须严格遵守规章制度
建议使用带滤芯的枪头进行操作
同位素[γ32P]ATP（1居里=37GBq），建议使用ICN或AMERSHAM（安玛西亚）公司
由于[γ32P]同位素的半衰期短，建议使用新鲜同位素材料；且标记后即刻使用
可以直接在GST融合蛋白树脂上进行标记，然后常规洗脱或凝血酶（THROMBIN）切离纯化；纯化后进行同位素活性测定
本公司提供系列同位素处理试剂产品
质量标准
本产品经鉴定性能稳定
本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶
