GST蛋白纯化步骤
制备细胞裂解物：
1.每100ml培养物的细胞沉淀悬于4mlPBS；
2.加入溶菌酶至终浓度1mg/ml，冰上放置30min；
3.用针筒将10ml 0.2%Triton X-100强行注入细胞裂解物中，剧烈震动数次混匀；
4.加入DNase和RNase至终浓度5μg/ml，4℃震动温育10min；
5.4℃ 3000g（5000r/min）离心30min；
6.上清转移到一只新试管，加入DTT至终浓度为1mmol/L。
纯化融合蛋白：
7.细胞裂解物与50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混合，每100ml细胞培养物加2ml树脂，于室温下轻摇0min；
8.混合物于4℃以500g（2100r/min）离心5min，小心去掉上清并留样少许进行SDS-PAGE；
9.沉淀中加入10倍标准体积的PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋白；
10.4℃以500g（2100r/min）离心5min，小心去掉上清并留样少许进行SDS-PAGE；
11.重复步骤9和10两次；
12.结合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱缓冲液洗脱，也可用凝血酶，肠激酶或Xa因子切割，释放靶蛋白。
用谷胱甘肽洗脱融合蛋白：
a. 沉淀中加入1倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动10min，洗脱树脂上结合的蛋白；
b. 4℃以500g（2100r/min）离心5min，上清移至新管中；
c. 重复步骤a和b两次，合并3次的上清。
蛋白酶解从结合的GST融合蛋白上回收靶细胞：
a. 在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶，肠激酶或Xa因子。每毫升树脂加入50单位溶于1mlPBS的蛋白酶，颠倒离心管数次混匀，室温下震荡2-16h，用小规模实验确定精确时间；
b. 4℃以500g（2100r/min）离心5min，上清移至新管中；
13.10%SDS-PAGE分析每一步（细胞抽提，洗涤和洗脱）样品的蛋白质组成。
谷胱甘肽琼脂糖树脂的处理：
1.轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆；
2.取部分匀浆放入15ml聚丙烯管（每100ml细菌培养物需要2ml匀浆）；
3.4℃以500g（2100r/min）离心5min，小心去掉上清；
4.在树脂中加入10倍柱床体积的冷的PBS，颠倒数次，混合匀浆，4℃以500g（2100r/min）离心5min，小心去掉上清；
