去甲变肾上腺素ELISA试剂盒使用说明（一）
前言说明
儿茶酚胺类肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺都是在肾上腺髓质、交感神经系统和脑中合成的。它们几乎影响所有的组织，并与其它激素和神经系统一起参与各种生理过程的调节。因为儿茶酚胺类物质以及它们的代谢产物变肾上腺素和去甲变肾上腺素在许多疾病中的分泌都会增加，因此对它们进行检测可用于这些疾病的诊断。在这一实验中，诊断和神经系统的续发性肿瘤都具有特殊的重要性。这一技术主要用于嗜铬细胞瘤、神经细胞瘤和神经节细胞瘤的诊断检测。10%的嗜铬细胞瘤表现为恶性增长。而在良性肿瘤中可发现儿茶酚胺类物质及它们的代谢产物变肾上腺素和去甲变肾上腺素都会增加。
1、应用范围
此酶免试剂盒可用于人体尿液中去甲变肾上腺素的体外定量检测,可手动操作也可自动操作.
2、实验原理
此ELISA试剂盒利用的是竞争法原理，生物素标记抗原和未用生物素标记抗原竞争结合一定量的抗体结合位点。结合到抗体上生物素标记抗原的量与样品中被分析物的浓度成反比。反应系统达到平衡后，未结合的生物素标记的抗原用洗涤液洗去。以抗生物素碱性磷酸酶作为标记物，以PNPP(对硝基苯酚磷酸盐)作为底物液来检测结合到抗体上的生物素抗原的量。将未知物的酶反应活性和已知标准品的反应曲线相比较，可以得到未知物的量。
3、 意事项和预防措施
1) 此试剂盒仅用于体外诊断和专业人士使用。
2) 在检测开始之前，仔细和完整的阅读说明书，使用试剂盒提供的包装插件的有效版本，确保所有的程序都清楚。寻求更多信息（比如：临床背景，检测操作，自动化操作说明，可选择的软件，文献等等），请查看IBL公司主页。
3) 如果试剂盒有破坏的请与IBL公司联系或是提交你的申请，但自您拿到试剂盒后最迟不超过一个星期。检测时请不要使用已被损害的试剂，以确保自身安全。
4) 按照批号和有效期，不混合使用不同批号的试剂，也不要使用过期的试剂。
5) 遵守好的实验准则和安全指南。穿实验服，带橡皮手套，有必要时请戴护目镜。
6) 此试剂盒中含有会伤害眼睛和皮肤的有害试剂。请阅读材料来源和标签获取详细信息。产品的材料安全数据单能够从IBL公司主页上下载，也可直接咨询IBL公司获取。
7) 根据国家生物有害物质及安全条例，所有化学药品和准备或使用过的试剂都应当做有害物质进行处理。
8) 不要接触终止液，以免造成皮肤损伤或着烧。
4、 存与稳定性
试剂盒和运输环境和储存环境温度为2-8℃，避免热源或太阳直射。样品的储存与稳定性及试剂的准备将在相关章节中阐述。开封的试剂盒在有效期内稳定，前提是要将试剂盒用袋子密封并储存于2-8℃的环境下。
5、 样品的采集与贮存
注意 | 人体内的儿茶酚氨和间甲肾上腺素的释放会受到一些食品和药物的影响。因此在样品采集前72小时内病人应禁止服用下列食物和药品：维生素B，咖啡，香蕉，α甲基多巴，MAO，COMT抑制剂，还有降血压类药物。 |
尿液
可以是自然尿液也可使用24h尿液。将病人24h内的所有尿液都收集到，并混合于含10-15ml 6N的HCl防腐剂的试剂瓶中。 | ||
贮存 | ≤-20℃ | 避免热源或太阳直射，避免反复冻融，冷冻状态下运输样品。 |
稳定性 | 6个月 |
6、 试剂盒成分
注意 | 试剂盒有足够做96份单孔检测或48份双孔检测或间甲肾上腺素和去甲变肾上腺素共同检测时所需的试剂成分 |
数量 | 标记 | 成分 |
1×50mL | ASSAYBUF CONC | 检测缓冲液，10倍浓缩，内含磷酸缓冲液，BSA（牛血清白蛋白），1%的NaN3 |
1×2.25mL | ACYLREAG | 酰化试剂，即用，内含二甲基甲酰胺 |
1×10mL | INDICATIORBUF | 指示剂缓冲液，紫色，即用，内含Tris缓冲液和苯酚红（pH小于7.5时颜色会发生变化）。 |
2×50× | HYDRTUB | 水解试管，可处理的聚苯乙烯试管 |
1×20mL | HCl | HCl，即用，内含0.1M HCl |
1×12×8 | MTP | 包被板，可拆分，包被有抗兔IgG（羊，多克隆） |
1×7×0.35mL | CAL A-G | 标准品，A-G含去甲变肾上腺素和0.1M的HCl 0; 77; 192; 480; 1200; 3000; 7500μmol/L 0; 0.42; 1.05; 2.63; 6.56; 16.4; 41.0μmol/L |
1×2×0.5mL | CONTROL 1+2 | 质控1+2，即用，浓度及允许范围请见标签 |
3× | BIOTIN LYO | 去甲变肾上腺素生物素(冻干品)，内含去变甲状腺生物素, Tris缓冲液,<0.1%NaN3(可再生) |
1×7m L | ANTISERUM | 去甲变肾上腺素抗血清，内含含抗血清(兔),磷酸缓冲液,0.1%NaN3 |
1×250μl | ENZCONJ CONC | 酶联物(100×)，含抗生物素抗体,并联结到碱性磷酸酶上,Tris缓冲液,0.01%NaN3 |
9× | PNPP SUBS | PNPP底物片，含PNPP |
1×27mL | PNPP BUF | PNPP底物缓冲液，含二乙醇胺、水和0.05%NaN3 |
1×15mL | PNPP STOP | PNPP终止液，即用，内含1M的NaOH和0.25M的EDTA。 |
1×50mL | WASHBUF CONC | 洗涤液(10×)，含Tris缓冲液,HCL,吐温,0.2%NaN3 |
3× | FOIL | 粘性金属板 |
