HLA基因分型方法：PCR－SSCP法
PCR－SSCP法
1）提取DNA
同前RFLP法
2）PCR扩增
同前PCR-RFLP，也可加入1μCi32P-dCTP标记产物。
3）非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
1．取PCR的扩增产物，加凝胶加样液3μl，95℃加热变性2min，冰浴骤冷。同位素掺入的DNA取1μl稀释10倍，加样3μl。
2．取样品用微量加样器加入非变性聚丙烯酰胺凝胶样品孔中，200V电泳过夜。
4）放射自显影
1．未掺入同位素的PCR产物电泳后，取出凝胶床，撬去粘附的玻璃板，将凝胶浸在固定液中15min。
2．用0.2％ AgNO3浸泡10min，用去离子水冲洗。
3．在显色液中显影，直到获得满意效果。将显色好的凝胶转贴到滤纸上，照相分析结果。
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