组胺检测的试验过程介绍
（使用前，以HCl(1 3)和水洗涤全部塑料及玻璃容器）
1、标准曲线的绘制
吸取平行的各标准工作液5ml于50ml的玻璃或聚丙烯锥形瓶中，各瓶加10ml 0.1M的HCl并混匀。加入3ml 1M NaOH并混匀；在5min内，加入1ml OPT溶液并立即混合；准确于4min后，加入3ml 1.19M H3PO4并立即混匀。每次加液后，至少在OPT反应期间（顺序加入试剂到一组锥型瓶里，可同时进行6—10个OPT反应），充分混匀是很重要。用5ml 0.1M HCl代替组胺溶液作为空白，在1.5h内，以水为参比记录工作标准液的荧光强度(I)，用350nm吸收波长，和444nm发射波长，以(I)（经空白校正）对μg组胺/5ml试样作图。
2、测定
用甲醇萃取按17-28C,第一节中制得的样品。用4—5ml水洗柱，(a)，弃流出液。吸1ml萃取液加进柱内并加4—5ml水。立即使柱流出液进入50ml、内含5.00ml 1.00M HCl的容量瓶中，当液面在树脂上方约2mm处时，加入约5ml水洗脱，接着用大量水洗脱，直到约有35ml洗脱液为止。停止柱流，用水稀释到瓶的刻度，塞上瓶盖混匀，冷藏洗脱液。
吸5ml洗脱液于50ml锥型瓶中，吸取10ml 0.1M HC1加入，按C,自"吸加3ml 1M NaOH"开始进行。
如样品含量大于15mg组胺/100g鱼，吸取1ml样品-OPT混合液于10ml、盛有准确2ml空白-OPT混合液的烧杯中，充分混匀。读出新溶液的荧光强度，如想得到可测的读数，就用空白-OPT的混合液稀释试样。这个近似值表明，为准确地定量样品，进行第二次OPT反应前，要将洗脱液作适当稀释。此外，调节荧光计的灵敏度范围（如仪器有此装置）来估计稀释倍数。利用这些近似值，用0.1M HCl制备洗脱液的适当稀释试样。按C进行。
3、计算
绘制I对μg组胺/5ml溶液（用绕度（偏转）计或记录仪响应测量并经空白校正过的图应是一条过原点的直线，斜率=m=[(Ia/1.5)十Ib十2Ic]/3mg组胺/100g鱼=⑽(F)(1/m)(Is)
式中：Is、Ia、Ib、Ic分别为样品、1.5、1.0和0.5mg组胺标准的荧光强度。F=稀释倍数=ml洗脱液十ml 0.1M HCl/ml洗脱液，未稀释的洗脱液F=1
如果校正图形呈非线性，直接用标准曲线定量。横坐标上每一分度应≤0.1μg组胺/5ml溶液，从曲线最靠近0.05μg组胺/5ml溶液处，读出所有值。
mg组胺/100g鱼=⑽(F)(W)
式中：W=μg组胺/100e鱼（用标准曲线测得）
