黄曲霉毒素M1检测标准操作程序
目的：建立黄曲霉毒素M1检测标准操作程序，并按规程进行检测，保证检测操作规范化。
范围：适用于所有用黄曲霉毒素测定的供试品。
责任：检验员、实验室负责人、实验室经理对本规程负责。
正文：
HPLC条件：
色谱柱 | 黄曲霉毒素专用C18柱，150*4.6mm，5um |
流动相 | 乙腈－水（25：75） |
荧光检测器： | 激发波长365nm，发射波长435nm； |
流速 | 1.0ml/min |
进样量 | 20ul |
样品取样:真菌毒素分析的最大误差来源是样品的收集和取样过程，所以必需保证样品收集和取样具有代表性。
样品前处理：不同样品前处理有些不太相同，具体如下：
① 牛奶：水浴加热至40 oC；7000r离心15min，用上清液过柱净化；
② 乳粉和粉状婴幼儿配方食品：称取适量奶粉样品，用蒸馏水将其溶解，混合均匀使其充分溶解后，7000r离心15min，用上清液过柱净化；
③ 发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)：称取适量奶粉样品，溶于蒸馏水中，混合均匀使其充分溶解，调节 PH值至微碱性，高速均质器匀浆，水浴加热后，离心，取上清液过柱净化；
④ 干酪：称取适量切细或粉碎，过筛后加纯水溶解，高速均质器匀浆，超声提取后收集上清液，然后用石油醚进行两次萃取，然后用适宜的有机溶液萃取，取若干上清液过柱净化；
⑤ 奶粉：用蒸馏水溶解，混合均匀使其充分溶解，调节PH值至微碱性，水浴加热后，离心，取上清液过柱净化；
⑥ 奶油：称取适量加甲醇水溶解，震荡后使用分液漏斗取下层溶液，蒸干后复溶于水，用于过柱净化。
免疫柱净化步骤：
┅┅取出免疫亲和层析柱, 恢复至室温，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上。
┅┅将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下。准确移取清澈液注入玻璃注射器；
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约1-2mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体；
┅┅更换玻璃注射器与亲和柱连接，在注射器中加入10ml水，调节压力使水以约6mL/min流速清洗亲和柱。
┅┅准确加入4mL色谱级乙腈洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测。
注：洗脱后的待测样品最好用和缓的氮气在30 ℃下将洗脱液蒸发至体积为50～500 μL；收集管中的洗脱液即为纯化后的样品，可直接用ELISA,荧光和高效液相等方法检测。
HPLC 检测需要仪器与耗材
产品名称 | 说明 | 规格 |
FERMENTEK 黄曲霉素M1固体和液体标准品 | 0.1mg/1mg 0.5ug/ml, 溶于乙腈 | |
LabQuick黄曲霉素M1免疫亲和柱 | 用于 样品前处理柱 分析黄曲霉素 | 25支/盒 |
LabQuick 泵流操作架（6位） | 用于免疫亲和柱样品处理 | |
WhatMan黄曲霉毒素检测专用玻璃纤维滤纸 | 进口专用，用于过滤大分子干扰物质。 | 110，1.5um（100P） |
氮吹仪 | 氮气吹干，用于样品浓缩 | 国产 |
不锈钢均质器 | 0-22000r/min | 进口 |
技术咨询请联系北京安美生医药科技有限公司技术部。
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WhatMan黄曲霉毒素检测专用玻璃纤维滤纸
进口专用，用于过滤大分子干扰物质。
110，1.5um（100P）
氮吹仪
氮气吹干，用于样品浓缩
国产
不锈钢均质器
0-22000r/min
进口
黄曲霉毒素M1检测标准操作程序 | ||
文件类别：技术标准 | 编制依据： GB 5413.37—2010 | |
新订：√ 修订：□ | 制 定 者： 年悦 | 日 期：2011年12月26日 |
颁发部门：企管部 | 审 定 者：王韩元 | 日 期：2011年12月28日 |
分发部门：检测实验室、销售部、市场部 | 批 准 者： 唐峰 | 日 期：2011年12月30日 |
印制份数： 份 | 分发份数： 份 | 生效日期：2012年1月1日 |
