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【快检】农药残留快速检测仪器的原理及使用指导

2021.6.26

　　食用农产品中农药残留快速检测标准有哪些？

　　（1）国家标准GB/T 5009.199《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》。

　　（2）行业标准NY/T 448《蔬菜上有机磷和三基甲酸酯类农药残毒快速检测方法》。

　　有机磷类农药和氨基甲酸酯类农药的作用机理是什么？

　　有机磷类农药和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫神经中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死。如果存在有机磷农药，就与胆碱酯酶结合，胆碱酯酶就不能分解乙酰胆碱为乙酸和胆碱，造成乙酰胆碱在神经肌接头和体内其他部位的过量积聚，引起一系列神经中毒症状。

　　农药残留快速检测--酶抑制分光光度法的原理是什么？

　　乙酰胆碱酶水解后，水解产物可与显色剂反应产生颜色。有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。

　　为什么在测同一株蔬菜的不同部位农药残留时结果不一样？

　　研究表明，农药在蔬菜中的残留并不是均匀分布的，一般叶面上的农药残留量会比根茎部位的高，而菜叶尖部的农药残留又比叶面上的其他部位高。一些含有果蒂的蔬菜其蒂部的农药残留会明显高于其他部位。因此，同一株蔬菜的不同部位所测的农药残留结果不一定完全相同。所以在抽样时，应放大采样源的总量，并选择有代表性的部位进行测量，抽多株蔬菜取其叶尖部位进行检测，而不是取某一株进行检测。

　　农药残留快速检测仪有什么优缺点？

　　优点：操作简单方便，快捷，成本低，整个检测过程只需30分钟左右，它可以作为传统仪器分析方法的有益补充，针对市场、农场蔬菜农药残留量进行快速筛选监测，保证上市蔬菜食用的相对安全性。

　　缺点：酶试剂易失活，导致反应不稳定，检测结果误差大，重复性不好，实际应用中的确认率为60%-70%；存在检测盲区，部分设备只能检测有机磷和氨基甲酸酯两类农药，不能检测有机氯、菊酯类和其他类别的农药；不适合检测葱蒜类、香菜、韭菜、番茄、胡萝卜、茭白、蘑菇、花椒等容易出现假阳性的农产品；需要对检测人员进行专门培训，否则将会对出现的问题无法正确处理或判断，得出错误的结果。

　　上机测试时为什么一定要调零？

　　因为农药残留检测仪是光、电、机综合性的仪器，尤其是光，很容易受到外在环境的影响，比如供电电压、磁性等。调零，主要是让仪器进入不受干扰的良好状态下进行运行，以保证检测结果的准确性。

　　使用农药残留快速检测仪是否每次检测都需要做对照？

　　一般而言，对照不需要每次都做，对照做成功以后，几天内其他的样品检测可共用该对照值进行计算，有些农药残留检测仪器要求每次重新开机后都要进行对照测试，具体需要参考仪器的相关说明。但是，有以下因素变化时必须重新进行对照测试：

　　（1）缓冲液、酶、显色剂、底物的变更；

　　（2）操作人员的变动（主要指加腋及测试的人员）；

　　（3）实验场所的变化（包括场地、环境、温度的变化）；

　　（4）实验方法的变动；

　　（5）主要设备的变更（如移液器、检测仪器等）；

　　（6）检测现场环境温度频繁大幅度波动；

　　（7）试剂被污染；

　　（8）其他可能影响检测结果的变化因素；

　　农药残留快速检测试剂中的检验用水（溶解缓冲剂和配制底物的水）能用自来水或者矿泉水代替吗？

　　自来水一般都经过消毒处理，含有消毒剂以及其他的对酶活性可能产生影响的成分。矿泉水含有大量的离子也会对测定结果造成干扰。因此，不宜采用自来水或矿泉水作为检验用水，宜用蒸馏水、去离子水、纯净水作为检验用水。

　　样品测定出现抑制率为0的结果正常吗？

　　有时出现样品抑制率为0的现象是正常的，但全部样品都是0时，就需要查找原因。原因有以下几点：

　　（1）仪器使用不当；在做样品的同时，要做对照。对于对照和样品同时测定的仪器，对照多放在速测仪的第一通道，如果把样品放入本该放对照的通道，就会出现扣除对照时，把样品抑制率扣掉了，而当该样品抑制率太高时，后面的样品会出现抑制率为0的现象。

　　（2）试剂过期；酶活性低会出现抑制率为0的现象。

　　（3）操作错误；速测仪的试剂总共4种，按顺序添加，但当样品多时，有时会出现一个未添加，而下一个加两回的现象，如底物多加导致抑制率为0。

　　（4）取样时，所取菜叶表面残留较多清水。

　　（5）样品测试时，加完样品浸泡液后没有静置10分钟，反应时间太短。

　　（6）试剂的用量不准确，或移液器的用法不正确，导致试剂的加入量不准确。

　　农药残留快速检测仪的使用有哪些注意事项？

　　（1）目前，国内外采用的分光光度法测定农产品农药残留时，葱、蒜、萝卜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄的汁液中含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时（包括含叶绿素较高的蔬菜），不要剪得太碎。测定番茄时，可将提取液放在果蒂处浸泡2分钟，取浸泡液测定。测定韭菜或大蒜时，可整根或整颗粒放入容器中，加入提取液后振摇提取测定。

　　（2）待测样品加入底物之后，应马上摇匀，放入测定仪，否则影响数据准确性。

　　（3）酶抑制法最关键的试剂是酶，酶的活性降低或失去活性时就会出现假阳性，空白对照测试3分钟的吸光光度变化值△A0应在0.3以上；

　　农药残留快速检测试剂的使用有哪些注意事项？

　　（1）试剂应存放在4℃的冰箱内，缓冲剂（液）放置于室温环境中保存即可。保质期一般为12个月；

　　（2）留意对照值检查酶活性，正常活性△A0为0.4～0.8；

　　（3）在有效期内使用，任何试剂使用时，用一瓶打开一瓶，用完后才使用新的，防止变质；

　　（4）器具专用原则；任何用于移液的器具和容器都应各自贴上标签，单独使用，以免交叉污染。

　　（5）试剂只出不入原则；测试时，从任何试剂瓶吸出的试剂，禁止再次注射回试剂瓶。

　　（6）环境温度对测试的影响，当环境温度过低时，测试时需作必要的保温措施。

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