切口平移法标记探针的步骤
(1)模板 DNA 的制备
用限制性内切酶将载体上的外源 DNA 酶切并进行琼脂糖凝胶电泳回收纯化,琼脂糖残留可抑制切口平移反应,因此彻底清除琼脂糖至关重要。也可以用带有外源 DNA 克隆片段的重组载体为模板来切口平移制备探针。
(2)切口平移标记
将模板 DNA 水溶液、DNase Ⅰ、未标记的三磷酸单核苷酸混合物、切口平移标记缓冲液、DNA 聚合酶Ⅰ、32P 标记的核苷酸依次加入反应管,14℃保温20min。
(3)纯化标记探针,测定活性,-20℃保存,1～2周内可用。
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