一、实验材料准备
BLAB/C-nu/nu小鼠，鼠龄3-5 wk，雌雄兼用，其实验和饲养均在SPF条件下的超净层流架中进行，灭菌水和饲料供动物自由摄入。GC9811常规传代。
二、
1. 收集体外培养的对数生长期的GC9811细胞，调节细胞数为1×1010L-1，每只裸鼠取0.2 mL注入右大腿背侧皮下，当皮下移植瘤长至直径为1.5 cm左右时取出移植瘤，瘤组织用锋利的小刀切成约0.1 cm直径的小块，选择已禁食12 h的10只裸鼠，术前用乙醚吸入麻醉。
2. 常规消毒皮肤，选择左侧正中旁切口，打开腹腔将胃拉出，用5.0丝线对胃大弯侧前壁浆膜层做荷包缝合（直径约 cm）用小手术刀细心划伤荷包中心胃壁浆膜层，然后将预先切好的3-4块瘤组织包埋入囊内，扎紧荷包缝线，缝合腹膜（含肌层）及皮肤。
3. 当裸鼠处于濒死状态时，将其中1只用颈椎脱位术处死， 取出移植瘤，一部分瘤组织以原代移植方法行鼠间连续原位传代（每次传代5-10只裸鼠），按上述方法收集细胞、打开裸小鼠腹腔，于裸鼠胃窦大弯侧中部的胃壁浆膜下注射GC9811 细胞悬液0.2 mL，并可见浆膜下鼓起一透亮小泡为标志，停留数秒钟后抽出针头，并用750 mol L-1乙醇棉球擦拭注射部位及其附近的胃浆膜面，以杀死溢流出来的瘤细胞。
4. 将胃送回腹腔并用4.0号手术缝线缝合腹壁肌层及皮肤。
5. 同前收集细胞悬液，腹腔移植瘤模型的裸鼠与尾静脉移植瘤模型的裸鼠分别于腹腔内、尾静脉各注入GC9811 细胞悬液0.2 mL，皮下移植瘤模型的建立同前。
6. 移植后的裸鼠分组分笼于SPF条件下饲养，逐日观察，待荷瘤裸饲养至濒死状态或自然死亡，解剖观察，记录肿瘤侵润和转移情况，对移植瘤和接种瘤分别观察并测量瘤体的长（L）、宽（W）、高（H），用公式V=π/6（L×W×H）计算其体积。
7. 标本经40 gL-1的中性甲醛固定，常规石蜡切片，光镜检查。
8. 余下瘤组织液氮冻存备用。
9. 裸鼠处死前，采用摘眼球方法采集血液，及时分离血清检测或-200℃冰冻保存待测，以正常裸鼠血清为对照，用放免分析法检测血清中CEA的含量。
10. 制备单细胞悬液，调整细胞密度至1×1010L-1，4℃，750 mol L-1乙醇固定，染色，流式细胞仪测定。
11. 采用Barlogie细胞同期分析法，将处于不同时期的细胞分为G1，S，G2期细胞。
12. 以正常组织对照按公式（DI=肿瘤组织G1峰值/正常组织G1峰值）计算DNA指数。
13. 实验数据用x±s 表示，采用t检验检测各组之间的差别。
14. 移植的肿瘤在原位均有生长，术后3 wk左右于裸鼠上腹部可扪及直径约2-3 mm质地较硬的结节，6-7 wk 时上腹部可扪及较明显的肿块，动物衰竭明显，荷瘤鼠生存时间6-9（平均7.5）wk。 移植瘤呈结节状，质地较硬，大小为0.4 cm×0.3 cm×0.3 cm-2.6 cm×1.8 cm×1.9 cm，病理证实癌细胞侵袭胃壁固有肌层及胃腔表面粘膜层，肝内转移，淋巴结转移。 展开 | 
