蛋白质定量分析
实验概要
Bradford 的dye-binding method 是利用Coomassie brilliant blue G-250 (CBG) 可与蛋白质结合而变色的特性来定量；若试样中的蛋白质量较多，则结合到蛋白质而变色的CBG 也多，因而呈色较深。本实验是以一组标准蛋白质为对象，制作一条蛋白质量与吸光度的标准校正线。
主要试剂
Buffer A-0
BSA标准品 (Bio-Rad, bovine serum albumin, 100 μg/mL)
未知浓度样本 (unknown BSA, 0.8 mL)
Dye Reagent (Bio-Rad 500-0006) 先以水稀释四倍备用。
以染料Coomassie brilliant blue G-250 配制的溶液，勿与胶体电泳染色用的CBR-250 混淆，各有其使用上的特色，不要互用。
标准品及样本：
标准品系列：使用小试管准备一组BSA (b) 标准品的系列稀释：
配制一定要精准，否则校正直线不会很准确；各种试剂的添加，若自稀往浓取样，则可以不用换吸管头。
未知样本：再以上述unknown BSA (c) 准备两种未知样本：Label 未知样本 (c) Buffer A-0 Final Conc.
一般样本：1) 通常由色析法所收集到的各分划样本，都可以直接进行蛋白质定量分析；但若其中含有某些干扰因子 (如含有Triton)，或样本的浓度太浓，都必须将样本稀释后再测。2) 同一样本的若干不同稀释浓度，所测出来的最终蛋白质浓度会有差异，通常是以稀释度大者较为准确。
主要设备
ELISA光度计 (Dynatech)
微量滴定盘 (microtiter plate, Nunc F96 Maxisorb 442404)
Micro test tubes
大头针或喷火枪
实验步骤
1. 每槽先加好50 μL标准品 (#0, #1 .... #5) 或未知样本 (X1, X2)，以二重复加入96 孔滴定盘中，如图所示。
2. 每槽再加入200 μL Dye-Reagent (d)，在全部样本槽加完前，不要中断添加；同时小心避免气泡产生。
3. 轻拍滴定盘一侧，使添加的各成份均匀混合，注意Dye-Reagent 密度较大，很容易沉积在下方而分层。若还有小气泡，小心以大头针刺破，大量时可用喷火枪火焰烧破。
4. 静置室温10 min。
5. 以ELISA reader测量570 nm (或595 nm) 的吸光值。
附 件 (共3个附件,占53KB)
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