临床微生物培养基手册（三）
葡萄糖氧化发酵培养基（O/F）
成份：
蛋白胨 2．7克 氯化钠 5．0克
0．2%溴麝香酚兰 0．03克 琼脂 3克
KH2PO4 0．3克 葡萄糖 10．0克
水 1000毫升
制法：以上成份除糖外，溶解调PH7．0，10磅高压灭菌20分钟后备用．
方法：挑取少量培养物接种两管，其中一管接种后加液体石腊不少于1厘米厚，两管同时35℃，培养过夜，
观察颜色的变化，若无颜色变化，需继续观察七天，每日观察刺层型别．
用途：适用于微球菌科和非发酵菌的鉴定．
麦康凯培养基
成份：
蛋白胨 20克 氯化钠 5克
乳糖 10克 琼脂 20克
H2O 1000毫升 1%中性红溶液 3--4毫升
1%结晶紫 0．1毫升 PH7．4
除中性红临时用时加入外，其余均高压灭菌备用．
邻硝基酚半乳糖甙（ONPG）酶试验
缓冲液：
Na2H2PO4 6．9克 溶于40DW中，用5NNOH调PH7．0，再加水到50毫升，冰箱保存．用前若有结晶可稍加温，溶解后再用．
ONPG液：
称取ONPG（邻硝基酚--B--D半乳糖苷）80毫克，溶于15毫升D.W中，再加上缓冲液5毫升，放入冰箱中保存．此液不稳定，如出现黄色即不能用．
鉴别：
脑膜炎球菌和乳糖球菌及沙门氏菌属与枸橼酸菌属及亚利桑那氏菌属．
脑膜炎球菌和沙门氏菌属为阳性．
乳球菌，枸橼酸菌属和亚利桑那菌属为阳性．
半固体培养基
成份：
牛肉膏 3克 蛋白胨 10克
氯化钠 5克 琼脂 2．5--4克
水 1000毫升
校正PH7．4，15磅高压15分钟．倾注平板，厚度约4mm，冷藏备用．
氨基酸脱羟试验培养基
成份：
L-氨基酸 0．5克 蛋白胨 0．5克
牛肉膏 0．5克 葡萄糖 0．05克
吡多醛 0．5克 水 100毫升
2%溴甲酚紫乙醇液 0．5毫升 2%甲酚红 0．25毫升
制法：除指示剂及氨基酸外，溶解，PH6．0，然后加入氨基酸（必要时重新调PH）及指示剂，混匀分装1毫升/管加10毫米厚石蜡油，高压10--15磅10--15分钟灭菌备用．
注意：
1 使用DL型AA时量加倍．
2 最好同时接种空白管（即不含有AA的同样培养基）作对照．
3 培养基超过24小时可出现假阳性．
葡萄糖酸盐培养基
成份：
蛋白胨 1．5克 酵母浸液 1克
K2HPO4 1克 葡萄糖酸钾 40克
DW 1000毫升
溶解过滤分装，高压10磅15分钟．
结果：加班氏试剂，加热观察结果．
黄-橙色为阳性． 无颜色变化为阴性．
阿拉伯糖（单糖）液体培养基
成份：
蛋白胨 1克 氯化钠 0．5克
DW 100毫升（调PH7．6）
1．6%溴甲酚紫乙醇溶液0．1毫升
阿拉伯糖 1克
菌种保存培养基
成份：
琼脂 10克 DW 1000毫升
浸10分钟加热溶解后，再加
牛肉膏 5克 蛋白胨 10克
氯化钠 3克 Na2HPO4.12H2O 2克
本培养基出自上海进出口商品检验局之处方，其最大优点为：细菌保存4年后，其形态菌属特点，生化反应，血清学试验等无变化．
厌氧培养基（GAM肉汤）
成份：
大豆胨 3克 口胨 10克
消化血清粉 13．5克 酵母浸膏 5克
牛肉膏 2．2克 牛肝膏（粉） 1．2克
葡萄糖 3克 KH2PO4 2．5克
可溶性淀粉 5克 L-半胱氨酸盐 0．3克
硫乙醇酸钠 0．3克 肉汤（牛心汤） 1000毫升
调PH7．2--7．4，10磅高压灭菌15分．
用途：用于厌氧菌培养，是一般培养基的基础，此培养基营养最丰富，用时无需加血，可用于各类厌氧菌
增菌用．
GMA琼脂
成份：
蛋白胨 10克 大豆胨 3克
口胨 10克 消化血清粉 13．5克
酵母浸液 5克 牛肉膏 2．2克
牛肝膏 1．2克 葡萄糖 3克
KH2PO4 2．5克 氯化钠 3克
可溶性淀粉 5克 L-半胱胺酸盐酸盐 0．3克
硫乙醇酸钠 0．3克 琼脂 1．5克
DW 1000毫升
调PH7．2--7．4，10分钟高压灭菌．
注意：1可溶性淀粉加热易成糊状凝块，最好先用水少许将淀粉混匀，再加沸水使成糊状，备用．
2此培养基营养丰富，无需加促进物质．
用途：用于分离培养厌氧菌．
硫乙醇酸盐半固体琼脂
成份： L-半胱氨酸 0．25克 葡萄糖 6克
胰蛋白胨 17克 大豆胨 3克
硫乙醇酸钠 0．1克 氯化钠 2．5克
亚硫酸钠 0．1克 琼脂 0．7克
DW 1000毫升
调PH7．6，11磅高压15分钟．
附：V—KL添加剂：
液体培养基0．1ug/毫升或0．1单位/毫升．固体培养基最终浓度10ug/毫升，冷却后再加VitKL．
淋球菌培养基：
基础琼脂 3．4克 无菌抗凝羊血 10毫升
20%葡萄糖溶液 1毫升 万古霉素 0．2毫升
多粘菌素B 0．0375毫升 水 90毫升
用法：
1取基础琼脂浸泡于水中，加热煮沸溶解，121℃高压灭菌20分钟．
2加入羊血和葡萄糖，于90℃水浴中加热，不时摇动使成咖啡色．
3冷却至60℃，加入万古霉素和多粘菌素B溶液，摇匀倒入平板，凝固备用．
醋酸铅试纸培养基（测H2S）
成份： 蛋白胨 10克 胱氨酸 0．1克
硫酸钠 0．1克 水 1000毫升
PH7．0-7．4 ，115℃高压灭菌20分钟．
滤纸剪成0．5-1CM宽，用5%-10%的醋酸铅浸透，烘干，置平皿备用．
厌氧培养基
1 液体培养基
多价蛋白胨 20% 胰蛋白胨 1%
酵母浸出汁 0．5% 氯化钠 0．5%
牛肉膏 5% 半胱胺酸 0．04%
氯化血红素 0．5% 溶剂（牛肉浸出液）溶解调PH7．4
2固体培养基： 加琼脂粉2．25%作血平板．
LISTER（100毫升）
液体用：
蛋白胨 2% 牛肉膏 5%
氯化钠 5% 酵母浸 0．5%
牛心浸液作溶剂
琼脂粉 0．8%
调PH7．4，每瓶25-30毫升分装．
固体用：同上，加温后加右旋糖苷20毫升或60℃左右加入明胶15%．
指示剂
1 NaOH 溶液： 0．1N NaOH 6毫升 DW 1000毫升
2 0．015%美兰溶液：0．5%美兰 3毫升 DW 1000毫升
3 6%葡萄糖溶液： 葡萄糖 6克 DW 1000毫升
以上1、2、3种溶液等量混合即成．
指示剂
硼酸二钠（10H2O） 2．5克 硫乙醇酸钠 2．4克
美兰 25毫升 DW 650毫升
郭氏培养基
成份： 牛心浸液 10毫升 葡萄糖 1克
酚红（0．4%） 1．3毫升 1%乙酸铊 2毫升
调PH8．2-8．3 108℃20分钟．
分装时加血清或血浆（灭活）20毫升， 0．1%美兰适量．
鞭毛染色法
玻片处理：将玻片用洗衣粉煮沸10分钟，水洗，再用清洁液浸泡，加温10分钟，水洗，再放入95%酒精脱脂，同时取出凉干，可制成涂片．
染色液的配制：
20%的鞣酸溶液（加温溶解） 2毫升
钾明矾饱和液 2毫升
石碳酸饱和液 5毫升
10%碱性复红无水乙醇溶液 1．5毫升
将上述各液混合后放置2-3日，过滤后备用，此液使用不得超大型过5周．
染色步骤：
将细菌接种在琼脂平板上，培养8-18小时，（35-37℃），用无水乙醇浸泡过的而且干燥的新玻片加一滴无菌DW，用接种环挑取菌落，置DW液面上，然后自然干燥．滴加染色液染1-2分钟，水洗干后镜检．
结果：鞭毛染成红色．
