多重PCR技术的基本原理
多重PCR基本原理与常规PCR相同,区别是在同一个反应体系中加入一对以上的引物,如果存在与各对引物互补的模板,则它们分别结合在模板相对应的部位,同时在同一反应体系中扩增出一条以上的目的DNA片段。多重PCR反应体系的组成和PCR循环的条件需要经过优化以确保同时扩增几个片段。
理论上只要PCR扩增的条件合适,引物对的数量可以不限,但由于各种条件的限制,实际能够扩增的引物对数量是有限的。
PCR结果的分析方法有以下几种,包括:琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、核酸杂限制性酶切分析、核酸测序等,其中琼脂糖凝胶电泳是最简单、最快速的方法,但是与聚丙烯酰胺凝胶电泳相比分辨率比较低。限制性酶切分析需要将PCR产物回收酶切后再次电泳,耗时费力,难以推广应用。
核酸测序是鉴定PCR产物最可靠的方法,但需要专门的测序仪器,并且需要花费的时间也比较长。如果要将鉴定感染性疾病病原的多重PR方法用于临床及现场流行病学调查,琼脂糖凝胶电泳是最佳的选择
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