强致癌物质黄曲霉毒素M1检测（二）
免疫柱净化步骤：完全符合GB/T 18980-2003
┅┅取出免疫亲和层析柱, 恢复至室温，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上。
┅┅将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下。准确移取清澈液注入玻璃注射器；
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约2-3mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体；
┅┅更换玻璃注射器与亲和柱连接，在注射器中加入10ml水，调节压力使水以约6mL/min流速清洗亲和柱。
┅┅准确加入4mL色谱级乙腈洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测。
注：收集管中的洗脱液即为纯化后的样品，可直接用ELISA,荧光和高效液相等方法检测。
HPLC 检测需要仪器与耗材
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产品名称 |
说明 |
规格 |
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黄曲霉毒素M1固体标准品 |
参比对照使用 |
100ug 1mg |
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黄曲霉毒素M1液体标准品 |
浓度0.5ug/ml, 溶于乙腈 |
1ml |
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PriboFast 黄曲霉素M1免疫亲和柱 |
用于 样品前处理柱 分析黄曲霉素 |
25/50T |
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PriboFast泵流操作架（8位） |
用于免疫亲和柱净化样品处理，方便控制流速 |
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黄曲霉毒素检测专用玻璃纤维滤纸 |
用于去除HPLC检测时部分杂峰，有效提高灵敏度。110，1.5um |
100P
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不锈钢均质器 |
高速匀浆样品，有效提高萃取效率 |
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旋转蒸发仪-超声波发生器 |
酶联免疫检测法：符合国家标准
酶联免疫检测法采用竞争ELISA，在微孔板上预包被黄曲霉毒素B1抗原，加入样本（或黄曲霉毒素M1标准品溶液）及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素M1抗体。样本或标准品溶液中的黄曲霉毒素M1与预包被在板孔上的黄曲霉毒素M1抗原竞争结合辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素M1抗体。未结合的酶标抗体在洗涤时被除去。再加入TMB显色液，读取吸光值。样本的吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素M1抗原的含量成负相关。对照标准曲线，即可得出相应残留物黄曲霉毒素M1的含量。
样品处理
牛奶 直接离心取上清液用于检测
奶粉及其他固状奶制品：需要溶解于去离子水中，离心取上清液用于检测
试剂盒检测时间：30分钟＋30分钟
交叉反应率：
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Aflatoxin M1 |
100% |
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Aflatoxin B1 |
8% |
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Aflatoxin B2 |
10% |
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Aflatoxin G1 |
7% |
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Aflatoxin G2 |
5% |
ELISA 方法检测需要：
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说明 |
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PriboFast 黄曲霉毒素M1酶联免疫检测试剂盒 |
检测范围 (0.1 ppb －8.1ppb) |
96孔 |
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雷勃半支灭菌移液器（彩色） |
多个量程：0.5-10; 20-200; 5-50; 1000-5000ul |
支 |
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雷勃八道半支灭菌移液器 |
量程： 5-50ul; 50-300ul |
支 |
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酶标仪 |
进口、国产仪器， |
台 |
分析人员要求：
化学分析仪器及其相关专业或有高效液相色谱仪操作经验的人员。
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技术原理
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焦点事件
