脑脊液的显微镜检查
一、 细胞总数
1、直接计数法 如脑脊液标本比较清亮或微混，可用此方法。
用滴管吸取已混匀的脑脊液标本少许，直接滴入细胞计数板，充入计数池内，静置2~3分钟，低倍镜下计数两个池内的四角和中央大格共10个大格内的细胞数，即为1μl脑脊液中的细胞总数（红、白细胞总数）。在书写报告时，再换算成每升脑脊液中的细胞总数。
2、稀释计数法 如果脑脊液的细胞过多、混浊或带血的脑脊液可用血红蛋白毛细吸管吸取混匀的脑脊液20μl，加入有红细胞稀释液0.38μl的小试管中，混匀后滴入计数池内，用低倍镜计数4个大方格的细胞总数，乘以50，即为每微升脑脊液的细胞总数，最后换算成每升脑脊液的细胞总数报告。
二、白细胞计数
1、直接计数 非血性标本，用吸管吸取冰乙酸后全部吹出，使管壁仅附着少许冰乙酸，然后用同一吸管吸取少量混匀的脑脊液标本，数分钟后红细胞就会完全溶解，再滴入计数池内，按上法计数。
2、稀释计数 如白细胞过多，可用白细胞稀释液稀释后，按上法计数，注意计数结果应乘以稀释倍数。
3、血性标本的校正计数 混有血液的脑脊液标本混匀后，用1%的冰乙酸溶液稀释后仍按上法计数。为了剔除因出血而带来的白细胞，可用下式进行校正。
每微升CSF内白细胞校正数=每微升CSF未校正的白细胞数－
三、白细胞分类计数
1、直接分类法 在白细胞直接计数后，转高倍镜观察，依据细胞形状和细胞核的形态进行分类，共计数白细胞和内皮细胞100个，分别计算单个核细胞和中性粒细胞所占的比例，以百分数表示。如白细胞总数不足100个，则直接写出单个核细胞和中性粒细胞的具体数字。如白细胞总数在30以下，可不做直接分类计数或改用染色分类计数。
2、染色分类法 脑脊液标本离心，取沉淀涂片，制成均匀薄膜，置室温或37℃孵箱中，干燥后以瑞氏染色，油镜下进行分类计数。以百分比表示之。如有内皮细胞，则另行描述报告。
四、注意事项
（1）脑脊液细胞计数应及时进行，一般应在1小时内进行。如放置过久，细胞会破坏或沉淀与纤维蛋白凝集成块，导致计数不准确。标本须混匀后方可进行计数，否则影响结果。
（2）穿刺损伤血管，导致血性脑脊液，此时细胞总数已无意义，白细胞计数也须校正后才有意义。
（3）细胞计数时，如发现较多的红细胞有皱缩或肿胀现象，应予以描述，以协助临床医生鉴别陈旧或新鲜出血。
（4）细胞计数时，须注意把红细胞或淋巴细胞与新型隐球菌相区别：
A、新型隐球菌具有“出芽”现象，不溶于乙酸，滴加0.35mol/L的乙酸后，显微镜下仍保持原形，而红细胞则被乙酸溶解消失，淋巴细胞则胞核和胞浆更为明显。
B、滴加印度墨汁一滴，加盖玻片，高倍镜下见新型隐球菌有夹膜，不着色，而红细胞或淋巴细胞无此现象。
（5）细胞计数板用完后，应用75%的酒精消毒60分钟。忌用苯酚消毒，因有损计数池的刻度。
五、正常参考值
正常人脑脊液中无红细胞，仅有少量白细胞。
成人：（0~8）×106/L
儿童：（0~15）×106/L
脑脊液中细胞多为淋巴细胞及大单核细胞，两者之比约为7：3，偶见内皮细胞。
六、临床意义
1、中枢神经系统病变的脑脊液，细胞数可增多，其增多的程度及细胞的种类与病变的性质有关。
2、中枢神经系统病毒感染、结核性或霉菌性脑膜炎时，细胞数可中度增多，常以淋巴细胞为主。
3、细菌感染时如化脓性脑膜炎，细胞数显著增加，以中性粒细胞为主。
4、脑寄生虫病时，可见较多的嗜酸性粒细胞。
5、脑室或蛛网膜下腔出血时，脑脊液内可见多数红细胞。
6、细胞数增减程度和细胞种类与某些疾病的程度有关，如化脓性脑膜炎经过有效的抗生素治疗后，细胞总数迅速下降；结核性脑膜炎患者在早期以中性分叶核细胞为主，以后则淋巴细胞较多；脑血管意外病人脑脊液中的红细胞数目减少，结合临床，预示着出血既将停止或已经停止。
七、病原体形态学检查
1、细菌 临床怀疑流行性脑脊髓膜炎或化脓性脑脊髓膜炎时，应做细菌学涂片检查。操作如下：
（1）脑脊液标本2~3ml，以3000rpm离心15分钟，去上清液，将沉淀物涂在洁净玻璃片上，共制片2张，涂片自然或在37℃温箱中干燥固定，且勿用火焰固定。
（2）涂片固定后，一张用亚甲蓝染色，另一张用革兰氏染色。
（3）革兰氏染色涂片用于检查肺炎双球菌、流感杆菌、葡萄球菌、绿脓杆菌、链球菌、大肠杆菌等，亚甲蓝染色用于检查脑膜炎双球菌。如找到细菌，则按其染色性质及形态报告。
（4）如怀疑结核性脑膜炎，可将脑脊液标本静置24小时，取其液面薄膜涂片，置37℃温箱中干燥固定，作抗酸染色，油镜下找抗酸杆菌。
（5）采集标本时应注意污染。显微镜观察时应注意细胞内外的细菌形态，报告时应予以描述。
2、真菌检查—新型隐球菌的检查
（1）取脑脊液标本，以2000rpm离心10分钟，沉淀物涂片，加经过过滤的优质细墨汁一滴，混合后加盖玻片显微镜下检查。
（2）先用低倍镜观察，如发现在黑色背景下有圆形透光小点，中间有一细胞大小的圆形物质，即转用高倍镜仔细观察其结构，新型隐球菌直径5~20μm，可见明显的厚夹膜，周围有较强的折光，并有出芽的球形孢子。
（3）发现上述特征，即可报告墨汁涂片找到“隐球菌属”。并须进一步作真菌培养。
3、寄生虫检查 将脑脊液标本离心，其沉淀物全部倒在玻片上涂片，低倍镜下检查可发现血吸虫卵、肺吸虫卵、弓形体、阿米巴等。
4、病原体检查的临床意义 正常人脑脊液中无病原体。脑脊液标本中如找到病原体，为临床提供了病因诊断的依据，有确定诊断的价值。如发现细菌，结合临床表现，可以确诊为该种细菌所致的脑膜炎；发现新型隐球菌，则可诊断为新型隐球菌性脑膜炎；发现血吸虫卵或肺吸虫卵，可诊断为脑性血吸虫病或脑性肺吸虫病。
八、细胞学检查
为进一步诊断，除用一般涂片进行瑞氏染色分类外，近年来还采用玻片离心法、醋纤膜浓集法、细胞沉淀法等，使脑脊液中的细胞浓集、染色，再进行细胞学检查，以提高诊断水平。
简便的脑脊液细胞收集法是细胞沉淀室法，把脑脊液标本倒在沉淀管内，让细胞直接沉降在玻片上，30~60分钟后，水份即由沉淀管周围的滤纸吸干，取下玻片干燥，先用瑞氏染液预染2分钟，加pH6.0的缓冲液稀释，1分钟后冲洗，再用姬姆萨染液复染8~10分钟，水冲洗，干燥后用油镜检查，并进行细胞分类计数。
如将微型细胞沉淀室同玻片一起离心（1000rpm）则为玻片离心法。细胞沉淀法和玻片离心法克服了脑脊液中细胞数目少和易破坏的特点，便于正确地进行分类计数，发现肿瘤细胞、白血病细胞等异常细胞，以及发现细菌和霉菌等。
