脑脊液有形成分检查（显微镜检查法）
1. 实验原理
在显微镜下对脑脊液有形成分进行计数和分类检查。
2. 标本采集：
2.1 标本种类：脑脊液，由临床医师进行腰椎穿刺采集，必要时可从小脑延脑池或侧脑室穿刺获得。
2.2 标本要求：将脑脊液分别收集于3个无菌试管中，第一管作细菌培养，第二管作化学分析和免疫学检查，第三管作一般性状及显微镜检查。每管收集1-2毫升。
2.3 遇高蛋白标本时可采用EDTA K2抗凝。
3. 标本储存：立即送检。
4. 标本运输：室温运输。
5. 标本拒收标准：污染，久置标本。
6. 实验材料：
细胞计数板；红细胞稀释液；瑞氏血细胞染色液，生产厂家：（台资）珠海贝索生物技术有限公司。
7. 实验仪器：
7.1 仪器名称： OLYMPUS 显微镜
7.2 仪器厂家：OLYMPUS
7.3 仪器型号：OLYMPUS CH30
8. 操作步骤
8.1 细胞总数
8.1.1 对澄清的脑脊液可混匀后用滴管直接滴入计数池，计数10个大方格内红、白细胞数，其总和即为每µl的细胞数。再换算成每升脑脊液中的细胞数。如细胞较多，可计数一大格内的细胞×10，即得每µl脑脊液中细胞总数。如用升表示，则再乘以106。也可用生理盐水或红细胞稀释液稀释后再用人工计数，或直接用血细胞分析仪进行计数。
8.1.2
浑浊或带血的脑脊液可用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液20µl，加入含红细胞稀释液0.38ml的小试管内，混匀后滴入计数池内，用低倍镜计数4个大方格中的细胞总数，乘以50，即为每µl脑脊液的细胞总数。
8.2 白细胞数
8.2.1 非血性标本：小试管内放入冰乙酸1-2滴，转动试管，使内壁沾有冰乙酸后倾去之，然后滴加混匀的脑脊液3-4滴，数分钟后，混匀充入计数池，按细胞总数操作中的红、白细胞计数法计数。
8.2.2 血性标本：将混匀的脑脊液用1%冰乙酸溶液稀释后进行计数。为剔除因出血而来的白细胞数，用下式进行校正。
每µl脑脊液内白细胞校正数
每µl脑脊液内红细胞数×每µl脑脊液内白细胞数
=每µl脑脊液内白细胞未校正数－
每µl血液内红细胞数
例示：血液内红细胞4 000 000/µl
；
脑脊液内红细胞20 000/µl；
血液内白细胞10 000/µl；
脑脊液内白细胞60/µl
20 000×10 000
则：60－ =60-50=10
4 000 000
即该患者脑脊液内白细胞之校正数为10。
8.3 细胞分类
8.3.1 直接分类法：白细胞计数后，将低倍镜换为高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞核的形态分别计数单个核细胞（包括淋巴细胞及单核细胞）和多核细胞，应数100个白细胞，并以百分率表示。若白细胞少于100个，应直接写出单核、多核细胞的具体数字。
8.3.2 染色分类法：如直接分类不易区分细胞时，可将脑脊液离心沉淀，取沉淀物2滴，加正常血清1滴，推片制成均匀薄膜，置室温或37℃温箱内待干，进行瑞氏染色后用油镜分类。
如见有不能分类的细胞，应另行描述报告，如脑膜白血病或肿瘤时。
8.4 寄生虫学检查：经沉淀涂片认真寻找虫卵、幼虫等。
8. 结果判断与分析
9. 质量控制：进行室内工作人员比对分析，要求差异在10％以内。
10. 参考范围
11.1 成人脑脊液内无红细胞，白细胞极少，其参考范围：
腰池中为（0-10）×106/L；脑室内为（0-5）×106/L；
儿童为（0-15）×106/L，新生儿为（0-30）×106/L。
如白细胞达（10-50）×106/L为轻度增加，（50-100）×106/L为中度增加，200×106/L以上显著增加。
11.2 正常脑脊液中白细胞主要为单个核细胞，多为淋巴细胞及大单核细胞，两者之比约为7：3，偶见内皮细胞：软脑膜和蛛网膜细胞、室管膜细胞、脉络膜细胞等。
11. 临床意义
12.1 中枢神经系统感染性疾病时脑脊液根据细胞病理学变化分三个不同时期：①急性炎性渗出期，呈粒细胞反应；②亚急性增殖期，呈激活淋巴细胞或单核-巨噬细胞反应；③修复期呈淋巴细胞反应。化脓性脑膜炎的急性期变化最突出，持续时间最长；此期脑脊液细胞数每微升可高达数千，以中性粒细胞为主，当用抗生素治疗后，脑脊液细胞数迅速下降。梅毒性脑炎亚急性期出现较早，持续时间较长，脑脊液中细胞数轻度增加，以淋巴细胞为主，在单纯疱疹病毒性脑炎的脑脊液淋巴样细胞中可发现胞质内包涵体，结核性脑膜炎时其脑脊液细胞数可增加，但超过500×106/L者较为罕见，在发病初期以中性粒细胞为主，但很快下降，由于患者多在发病数天后才来诊治，因此首次腰穿时，脑脊液中中性粒细胞已趋下降而淋巴细胞为多。粒细胞、淋巴及浆细胞同时存在是结核性脑膜炎的特点。新型隐球菌性脑膜炎可在脑脊液中直接发现隐球菌，必要时用印度墨汁染色予以确诊。
12.2 中枢神经系统肿瘤脑脊液细胞总数可正常或稍高，以淋巴细胞为主。脑脊液中能否找到肿瘤细胞取决于肿瘤位置及恶性程度、穿刺部位和采集标本的多少。同时也与检查者技术水平有关，采用细胞正玻片离心沉淀仪可提高检出率。脑脊液找到白血病细胞是白血病脑膜转移的证据。
12.3 脑血管病脑脊液细胞学检查有助于鉴别脑出血或腰穿损伤性出血。前者在早期病后数小时可见大量红细胞和明显中性粒细胞增多，2-3天内达高峰，在脑脊液中可发现吞噬细胞，出血后数小时至第3天可出现含有红细胞的吞噬细胞，5天后可见含铁血黄素吞噬细胞。如为穿刺损伤性出血则不会有上述反应。
12.4 脑寄生虫病不仅脑脊液细胞数升高，并可见嗜酸性粒细胞增多，约占白细胞的60%或更高。浆细胞增多为另一特点。如将脑脊液离心沉淀物全倾倒在玻片上，在显微镜下检查可发现血吸虫卵、阿米巴原虫、弓形体、旋毛虫的幼虫等，甚至还可找至细粒棘球绦虫的头节或头钩。
12.5 红斑狼疮有时可在脑脊液中找到红斑狼疮细胞。
12. 方法学评价
细胞计数为手工法，存在人为误差。细胞较少时应增加计数池计数面积。当穿刺损伤血管导致血性脑脊液或出血性脑血管病时，计数细胞总数已无意义，白细胞数亦须经校正。
细胞分类检查一般用脑脊液离心沉渣涂片，经瑞特染色后用油镜分类，但细胞形态常受影响。为了尽可能多地收集细胞和保持完好的细胞结构，国内一些单位已将细胞玻片离心沉淀仪运用于脑脊液细胞学检查，提高了癌细胞的检出率，在细胞染色技术上也采用这种方法。目前常用染色方法为MayGnimwaldGiemsa染色法。其客观存在如吖啶橙荧光染色法适用于对瘤细胞的辨认；非特异性酯酶染色法适用脑脊液中T细胞辨认；高碘酸雪夫染色法用以鉴别腺癌细胞和原淋巴细胞；过氧化物酶染色用以鉴别形态相似的幼稚细胞；脂类染色法用于鉴别脂类吞噬细胞；硝基四氮唑染色法用于鉴定成熟和幼稚的中性粒细胞等。
14. 操作注意事项：
14.1 脑脊液标本必须立即送验及时检查，放置过久将影响检验结果，使细胞破坏、变性、或细胞包裹于纤维蛋白凝块中，导致细胞数降低、分类不准确等。
14.2 细胞计数时，应注意新型隐球菌与白细胞的区别。前者不溶于乙酸，加优质墨汁后可见不着色的夹膜。
14.3 计数池用后，应用75%乙醇消毒60min。忌用苯酚消毒，因有损计数池的刻度。
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科技前沿
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综述
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项目成果
