筛选或验证RNA修饰直接靶点，研究RNA修饰靶基因的调控...
筛选或验证RNA修饰直接靶点，研究RNA修饰靶基因的调控机制
技术简介
用体外转录法标记生物素RNA探针，然后与胞浆蛋白提取液孵育，形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过Western
Blot检测特定的RNA结合蛋白是否与RNA相互作用，质谱实验检测特定的RNA结合蛋白鉴定蛋白质类型。
云序RNA pull down实验流程
云序优势
低丰度富集：
富集检测低丰度目的蛋白-RNA复合物
具有成熟蛋白质组学平台：
提供RNApull-down 产物WesternBlot及质谱鉴定。
专业的生信信息分析：
提供SCI发表级别的图表。
样本要求
样品类型:
细胞或组织，其它样品信息请详询
样品量:
a）细胞：5×108
b）组织：500 mg
样品运输与保存:
样品运输：样品置于1.5mL Eppendorf管中，封口膜封好，干冰运输。
样品保存：细胞样品或新鲜组织块液氮冻存后-80℃保存。
案例解析
案例 1. RNA pull down检测lncRNA与蛋白质相互作用
近年来，大量的研究表明长链非编码RNA（LncRNA）与多种cancer的发生息息相关，这篇文章中作者研究了在非小细胞肺ai（NSCLCs）中起重要调控作用的lncRNA-linc00630。作者通过RNA
pull
down等实验发现，linc00630主要通过结合组蛋白去乙酰化酶I（HDAC1）以及DEAD-box解旋酶23（DDX23）来发挥其功能机制。
图1. 长链非编码RNA-Linc00630表达验证及功能表征
案例2. RNA pull down检测circRNA与蛋白质相互作用
环状RNA是近年来受到关注一类非编码RNA，目前主要认为环状RNA通过miRNA海绵机制调控基因表达，但是对于其更全 面的分子功能知之甚少。这篇文章中作者发现在不同cancer细胞中circ-Foxo3持续少量表达，而在cancer细胞凋亡的过程中，circ-Foxo3表达量明显增加。circ-Foxo3可以促进MDM2介导p53进入素化途径降解，使p53含量下降，同时circ-Foxo3又可以通过阻止MDM2介导Foxo3泛素化而提高Foxo3的表达量。
图2. circ-Foxo3cancer细胞中表达情况
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