离子交换高效液相层析实验
阴离子交换HPLC
阳离子交换HPLC
| 实验材料 | 蛋白质 |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | Tris·Cl NaCl 磷酸钠缓冲液 |
| 仪器、耗材 | 交换柱 |
| 实验步骤 |
1. 在使用IEX柱前，依次以序列溶液洗柱去除柱上吸附的蛋白质：10倍柱床的已脱气水和10倍柱床的高盐缓冲液，对聚合体IEX柱，洗柱液在8 ~10，对硅胶类柱，洗柱液pH在7~8。
3. 用210~220 nm 0.1~1.0 AUFS 监测空白的层析过程：0%~75%Tris/NaCl线性梯度20 min 以上，保持在75%缓冲液5 min，在5 min 以上的时间回复到0%。在下次上样前，保持0%缓冲液15 min。
4. 注射10 μl 0.2 mol/l Tris·Cl pH7.5进行一次空白样品的假层析。
6. 将每个层析峰收集干不同的聚丙烯管子，用反相HPLC脱盐，用Speedvac蒸发器除去溶剂。
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