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测定动物源食品中14种β-内酰胺类兽药残留量实验

2019.9.13

HPLC-MS/MS法

实验材料	动物肝脏肾脏肌肉鸡蛋牛奶
试剂、试剂盒	乙腈氢氧化钠磷酸缓冲液
仪器、耗材	鸡心瓶旋转蒸发器比色管漩涡混匀器离心管
实验步骤	1. 提取动物肝脏、肾脏、肌肉组织：称取5.0 g己粉碎样品于50 mL离心管中，加入15 mL乙腈-水（15 + 2），均质提取30 s，4000 r/min离心5 min，清液转移至50 mL比色管中；另取一离心管，加入10 mL乙腈-水（15 + 2），洗涤均质器刀头10 s；用玻棒捣碎离心管中的沉淀，加入上述洗涤均质器刀头溶液，在旋涡混匀器上振荡1 min，4000 r/min离心5 min （离心机温度20 ℃），上清液合并至50 mL比色管中，重复用10 mL乙腈-水（15 + 2）洗涤刀头和提取一次，合并定容至40 mL，取20 mL 至100 mL鸡心瓶中。鸡蛋：称取10.0 g样品于50 mL离心管中，加入15 mL乙腈-水（15 + 2），均质提取30 s，4000 r/min离心5 min，清液转移至50 mL比色管中；另取一离心管，加入10 mL乙腈-水（15+2），洗涤均质器刀头10 s；用玻棒捣碎离心管中的沉淀，加入上述洗涤均质器刀头溶液，在旋涡混匀器上振荡1 min，4000 r/min离心5 min（离心机温度20 ℃），上清液合并至50 mL比色管中，重复用10 mL乙腈-水（15 + 2）洗涤刀头和提取一次，合并定容至40 mL，取20 mL至100 mL鸡心瓶中。牛奶：称取10.0 g样品于50 mL离心管中，加入20.0 mL乙腈，均质提取30 s，4000 r/min离心5 min，上清液转移至50 mL比色管中；另取一离心管，加入10 mL乙腈-水（15+2），洗涤均质器刀头10 s；用玻棒捣碎离心管中的沉淀，加入上述洗涤均质器刀头溶液，在旋涡混匀器上振荡1 min，4000 r/min离心5 min（离心机温度20 ℃），上清液合并至50 mL比色管中，重复用10 mL乙腈-水（15 + 2）洗涤刀头和提取一次，合并定容至50 mL，取25 mL至100 mL鸡心瓶中。鸡心瓶置于旋转蒸发器上（37 ℃水浴）蒸发至除去乙腈（易起沫样品可加入4 mL饱和氯化钠溶液）。 2. 净化立即向己除去乙腈的鸡心瓶中加入25 mL磷酸盐缓冲溶液（pH为8.5），涡旋混匀1 min，用0.1 mol/L氢氧化钠调节pH值为8.5，以1 mL/min的速度通过经过预处理的固相萃取柱，先用2 mL磷酸盐缓冲溶液淋洗2次，再用1 mL超纯水淋洗。用3 mL乙腈洗脱（速度控制在1 mL/min）。将洗脱液于45 ℃下氮气吹干，用25 mmol/L磷酸盐缓冲溶液（pH为7.0）定容至1 mL。过0.45 um滤膜后，供液相色谱-串联质谱测定。 3. 测定条件色谱柱：COSMOSILC18柱，250 mm×4.6 mm，粒度5 um；流动相：B组分是乙腈，A组分是0.01 mol/L乙酸铵（甲酸调pH至4.5），梯度洗脱；流速：1.0 mL/ min；柱温：40 ℃；进样量：10 uL。展开