常量凯氏定氮法测定食品中蛋白质--操作方法
准确称取固体样品0.2～2g(半固体样品2～5g,液体样品10～20mL),小心移入干燥洁净的500mL凯氏烧瓶中,加入研细的硫酸铜0.5g、硫酸钾10g和浓硫酸20mL,轻轻摇匀,安装消化装置,并将其以45°斜支于有小孔的石棉网上。用电炉以小火加热,待内容物全部炭化,泡沫停止产生后,加大火力保持瓶内液体微沸,至液体变蓝绿色透明后,再继续加热微沸30min。冷却,小心加入20mL蒸馏水,待完全冷却后,加入玻璃珠数粒以防蒸馏时暴沸。
将凯氏烧瓶蒸馏装置连好,塞紧瓶口,冷凝管下端插入吸收瓶液面下(瓶内预先装入50mL40g/L硼酸溶液及混合指示剂2～3滴)。放松漏斗夹子,通过漏斗加入70～80mL400g/L氢氧化钠溶液,并摇动凯氏烧瓶,至瓶内溶液变为深蓝色,或产生黑色沉淀,再加入100mL蒸馏水(从漏斗中加入),夹紧漏斗夹子,加热蒸馏至氨全部蒸出(馏出液约250mL即可),将冷凝管下端提离液面,用蒸馏水冲洗管口,继续蒸馏1min,用表面皿接几滴馏出液,以奈氏试剂检查,如无红棕色物生成,表示蒸馏完毕,即可停止加热。将上述吸收液用0.1000mol/L HCl标准溶液直接滴定至由蓝色变为微红色即为终点,记录盐酸溶液用量,同时做试剂空白(除不加样品外,从消化开始操作完全相同),记录空白试验消耗盐酸标准溶液的体积。
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