酶联免疫吸附(ELISA)测定伤寒杆菌“O”抗体实验
实验材料 伤寒杆菌
试剂、试剂盒 邻苯二胺碳酸钠碳酸氢钠PBS磷酸氢二钠柠檬酸
仪器、耗材 聚乙烯塑料反应板离心机摇床培养箱
实验步骤
1. 抗原包被
取洁净的聚苯乙烯微量反应板,于每孔内加伤寒抗原0.1毫升(用包被缓冲液稀释,蛋白含量10微克/毫升),置37℃1小时,弃抗原液,用洗涤液3次每次3分钟。
2. 加待测血清
于每孔内分别加不同稀释度(如1:5,1:10,1:20…1:80)的待测血清,PBS空白对照,阴性对照血清,阳性对照血清各0.1毫升。置37℃30分钟,洗涤3次。
3. 加酶联A蛋白
于每孔加酶联A蛋白各0.1毫升,置37℃20分钟,洗涤3次。
4. 加临时配制的底物溶液各0.1毫升,置暗处15分钟。加2M碳酸1滴终止反应。
5. 结果判断:(肉眼判断)
若颜色于阴性对照相同则为阴性,若较阴性对照深则为阳性,根据颜色深浅以(+)表示
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