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如何避免非蛋白氮影响测定结果

2022.10.08

一、测定原理 硫酸铜在碱性溶液中,可将蛋白质沉淀,且不溶于热水,过滤和洗涤后,可将纯蛋白质和非蛋白质含氮物分离,再用凯氏定氮法测定沉淀中的蛋白质含量。 二、仪器设备 (1)烧杯:200mL。 (2)定性滤纸。 (3)其它设备与粗蛋白质测定性相同。 三、试剂及配制 (1) 100g/L硫酸铜溶液:分析纯硫酸铜(CuSO4 5H2O)10g溶于100mL水中。 (2) 25g/L氢氧化钠溶液:将2.5g分析纯氢氧化钠溶于100mL水中。 (3) 10g/L氯化钡溶液:1g氯化钡(BaCl2 H2O)溶于100mL水中。 (4) 2mol/L盐酸溶液。 (5) 其它试剂与一般粗蛋白质测定法相同。 四、测定步骤 准确称取试样1g左右(精确至0.0001g),置于200mL烧杯中,加50mL水,加热至沸,加入20mL硫酸铜溶液,20mL氢氧化钠溶液,用玻璃棒充分搅拌,放置1小时以上,用倾斜过滤(用定性滤纸),然后用60-80℃热水洗涤沉淀5-6次,用氯化钡溶液5滴和盐酸溶液1滴检查滤液,直到不生成白色硫酸钡沉淀为止。将沉淀和滤纸放在65℃烘箱干燥2小时,然后全部转移到凯氏烧瓶中,消化后进行氮测定。 五、结果计算 同粗蛋白质测定。

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