一、试剂配制
1. 培养基的配制： RPMI 1640培养基 4ml 小牛血清 1ml 青霉素和链霉素 各100U/ml PHA 0.2ml 肝素 1小滴 以5％ NaHCO3调pH至7.2～7.4。4℃备用。
2. 肝素：称取0.2g溶于100ml双蒸水中，浓度为0.2％，灭菌。
3. 秋水仙素：生理盐水配制成20μg/ml浓度，灭菌，分装，置-20℃。
4. 低渗液：0.075 mol/L KCI
5. 固定液：甲醇:冰乙酸(3：1)，临时配制。
6. Giemsa工作液：1份原液和9份磷酸缓冲液，临时配制。
7. 磷酸缓冲液：1/15mol/L Na2HP4、1/15 mol/L KH2PO4等体积混合。
8. 5％NaHCO3火菌滤器抽滤备用。
二、实验步骤
1. 接种，培养
（1）在无菌条件下，用灭菌注射器吸取0.2％肝素液(用生理盐水配制，灭菌)0.2ml，湿润针筒后，采静脉血1～2ml、转动注射器使血液与肝素充分混匀。
（2）无菌条件下，将肝素化血液滴入至外周血培养基内，每5ml培养液内滴入血滴28～30滴（7号针头）轻轻混匀。
（3）置37℃恒温箱内，静止培养68～72h。注意第二天观察培养液有无凝血、溶血或长菌的现象，可每天将培养液摇一摇以便细胞得到充分培养。
（4）终止培养前2~3h，加入浓度为20μg/ml的秋水仙素，每5ml培养基中用7号针头，加3~4滴使最终浓度为0.1μg/ml。轻轻摇匀后，再放入恒温箱内，继续培养2~3h，以积累较多停止在中期的分裂象。
2. 制片
（1）收获细胞：由恒温箱取出培养瓶，用吸管充分吹打培养瓶瓶壁，使细胞全部脱离瓶壁，然后将细胞液移至锥形离心管内，1500转/min，离心10min，去上清液。
（2）低渗处理：加入37℃预温的0.075mol/L KCl 8ml，反复吹打(约一百次)后，置37℃水浴箱中低渗处理25min左右。
（3）预固定：加入新鲜制备固定液1ml（甲醇:冰醋酸=3:1），轻轻混匀。
（4）离心：2000转/min，离心10min，吸弃上清液。
（5）固定：沿离心管壁慢慢加入固定液8ml，轻轻混匀，制成细胞悬液。 （6）离心：同上，吸去上清液。
（7）再固定：加固定液8ml，混匀，固定10mn。
（8）离心：同上，吸去上清液。。
（9）制细胞悬液：根据细胞量多少，加入适量固定液，充分混匀，制成细胞悬液。
（10）滴片：取出预先经冰水浸泡的载玻片，用吸管吸取混匀的细胞悬液在离冰片约30cm距离进行滴片，每片约滴2～3滴细胞悬液，使细胞较好分散。一般每一培养瓶可制3～5张标本片。
（11）染色：标本晾下后，即可用染液（Giemsa液原液1份，pH6.8的磷酸缓冲液9份）染色15min，自来水冲洗后（从背面冲洗）晾干。
3. 镜检：人类每个体细胞有46条染色体，根据染色体的长度和着丝粒位置的不同，可以分成22对常染色体和一对性染色体，男子是是46，XY；女子是46，XX。 展开 | 
