冰冻切片的原位杂交实验
实验材料 冰冻切片
试剂、试剂盒 Tris·ClEDTA甘氨酸PBSSSC乙醇甲酰胺硫酸葡聚糖DTTNaCl
仪器、耗材 加湿盒水浴锅培养箱
实验步骤
1. 从冰箱中取出载玻片，平衡至室温，再打开玻片盒。置载玻片于架中，浸泡于以50 mmol/l Tris·Cl（pH7.5）/5 mmol/l EDTA所配的链霉蛋白酶液中，放10 min。
2. 室温下将载玻片浸于含2 mg/ml 甘氨酸的PBS中30 s，然后再于PBS中浸2次，毎次30 s。
3. 浸载玻片于新配的TEA缓沖液中5 min。
4. 在一个烧杯中，配足量TEA缓冲液以没过载玻片。加乙酸肝至终浓度0.25%，迅速倒在载玻片上，晃动玻片架使液体充分混合，放置10 min。
5. 在2×SSC中洗载玻片2次，每次5 min。
6. 按顺序经30%、60%、80%、95%和100%乙醇依次缦泡脱水，每次浸2 min，干燥切片并马上用于杂交。
7. 沉淀标记的DNA或RNA探针。确定标记掺入的百分率（比活）并估计合成的探针量，并按最终每千碱基0.2 μg/ml 的浓度，估算杂交混合液的终体积，依此重悬探针沉淀。
推荐
