个体化裸鼠荷人肺癌肿瘤模型的建立实验——肺癌动物模型
个体化裸鼠荷人肺癌肿瘤模型的建立可以：（1）疾病定性筛选；（2）抗癌药物的筛选；（3）为患者进行个体化治疗提供药物筛选的依据；（4）为研究经过各项治疗后患者肿瘤细胞发生各种突变的情况和机制奠定基础。
| 实验方法原理 | 组织块移植组将直径2 mm的人肺癌新鲜标本癌组织块移植于BALB/C裸鼠背部皮下组织内，每例人肺癌新鲜标本均移植入5只裸鼠体内，成瘤者为第1代。取第1代移植瘤组织块以相同方法每例标本移植于另5只BALB/C裸鼠背部皮下组织内，成功者为第2代。重复上述传代方法得到第3代移植瘤。将人肺癌细胞株A549、H1795分别移植于BACL C裸鼠背部皮下组织内，成瘤达500 mm3后取癌组织块。分别取实验组的原代人肺癌肿瘤及第1、2、3代移植瘤部分组织，及作为对照的细胞系移植瘤组织，固定于10%福尔马林溶液中，石蜡包埋、切片、HE 染色，光镜下观察比较其形态异同。 |
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| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 一、实验材料准备
二、个性化人肺癌肿瘤组织块种植方法 1. 从手术切除的人肺癌新鲜标本中切取直径约1 cm左右组织块，保存于加入青-链霉素双抗的RPMI-1640培养液中，在标本获取6 h之内进行种植。
三、 移植后动物饲养和种植肿瘤观察 1. 动物种植肿瘤细胞后在无特定病原体（SPF）条件下饲养，被种植同一例肺癌患者标本组织块的5只裸鼠饲养于同一笼舍之内。 四、 肿瘤组织的传代
1. 待裸鼠皮下种植的人肺癌组织肿瘤体积达到800 mm3后，处死裸鼠剥取瘤块，按1.3所述肿瘤种植方法,每例标本再移植入5只裸鼠体内。此为第2代肿瘤组织块。
五、肿瘤组织病理学观察
取原代人肺癌肿瘤及第1、2、3代移植瘤部分组织固定于10%福尔马林中，石蜡包埋、切片、HE 染色，光镜下观察。
六、 人肺癌细胞株种植方法 1. 人肺癌细胞株A549、H1795，用含10%小牛血清的DMEM培养液，在37 ℃、2.5% CO2及饱和湿度的恒温箱培养，用0.25%胰蛋白酶消化制成单细胞悬液，台盼蓝拒染法计数活细胞数占95%以上。 |
| 其他 | 一、实验讨论 相对于其他疾病，肿瘤临床治疗的有效率目前仍然偏低。随着人类基因组学、药物基因组学及肿瘤分子生物学研究的不断深入，研究者对肿瘤多成因、异质性的特点有了更加全面的认识。个体化治疗已经成为肿瘤临床治疗的发展方向和最有效的手段。但是，如何识别具有相同肿瘤发生部位、相同病理类型及病期的不同患者之间存在的差异成为实施个体化治疗的主要障碍。
本研究所建立的肺癌动物模型，其肿瘤来源于不同患者手术切除的标本，不再是某一个固定的细胞系。通过裸鼠成瘤实验显示生长出来瘤块的病理改变与人原发肺癌病理具有相同的组织学特点和排列结构，明显优于细胞系种植后所生长的瘤块，能够更好地代表不同患者个体，具有个体化特征。建模成功的肺癌动物模型，尽管其肿瘤来源于不同患者，但均能稳定传代，为今后进行肺癌个体化治疗的系列研究奠定了基础。 |
