影响电泳色谱仪泳动速度的因素
影响电泳色谱仪泳动速度的因素有电场、缓冲液和支持介质等。
一、电场：
1、电场强度：
电场强度对带电颗粒的泳动速度起着十分重要的作用。电场强度越大，泳动速度越快，单位时间内颗粒的迁移距离越大，分离时间越短。
根据电场强度大小，电泳可分为常压电泳（100～500V）和高压电泳（500～5000V）。常压电泳的电场强度一般为2～10V/cm，分离时间长，需数小时到数天，多用于分离大分子物质。高压电泳的电场强度一般为20～200V/cm，分离时间短，有时仅需数分钟，多用于分离小分子物质。
2、电极和电极反应：
电泳的电极材料大都采用铂金丝，铂金丝的安放位置影响电场强度。若两极间铂金丝位置放的不好，电场强度不均匀，常会使电泳谱带弯曲或同一样品的泳动速度不同。
通电过程中电极两端会发生电解反应：
正极（氧化极）：2H2O → 4H+ + O2+4eˉ
负极（还原极）：2H2O + 2eˉ→ 2OHˉ+ H2
在电泳过程中，正负极均有气体产生，负极有密集的氢气泡，正极有较大的氧气泡。电泳后，两个电泳槽的pH值会相差很大（2～4个pH）。另外，在电泳过程中会产生热量，尤其是高压电泳，因此高压电泳槽需有冷却装置，常压电泳可放在冰箱中降温。
二、缓冲液：
缓冲液的成分和浓度决定并稳定支持介质的pH和溶液的离子强度，影响带电颗粒的泳动速度。
1、成分：
对缓冲液成分总的要求是不使样品变性，不改变支持介质的理化性质，不影响电泳后染色，有利于电泳进行和样品分离。
常用缓冲液有巴比妥（钠）、硼酸（钠）、磷酸盐和Tris等。根据电泳类型和分离对象选用缓冲液成分，如用纸电泳分离血清蛋白可选用巴比妥－巴比妥钠缓冲液，聚丙烯酰胺凝胶电泳分离酶可选用Tris－甘氨酸缓冲液。
2、浓度：
缓冲液的浓度主要影响溶液的离子强度。离子强度是离子浓度和离子价数的函数，离子强度越高，带电颗粒的泳动速度越慢。
缓冲液的浓度过高，带电颗粒会吸引相反符号的离子聚集在其周围，形成一个离子扩散层，一方面影响颗粒所带的电荷量，降低其在电场中的电场力，从而影响泳动速度；另一方面，当加以电场时，颗粒向与其电荷相反的电极移动，即带正电荷的颗粒移向负极，带负电荷的颗粒移向正极，离子扩散层由于携带过剩的与颗粒符号相反的电荷，则向相反方向移动，因颗粒与离子扩散层之间的静电引力，使颗粒的泳动速度减慢。
缓冲液的浓度过低，离子强度低，影响溶液的导电性；使样品分子扩散加重，分辨率下降。因此，缓冲液的离子强度一般控制在0.02～0.2之间。
3、pH：
溶液的pH值决定带电颗粒的解离程度，决定颗粒所带电荷的性质和数量，决定颗粒的迁移方向。如蛋白质，当溶液的pH低于蛋白质等电点时，蛋白质分子带正电荷成为阳离子。当溶液pH大于等电点时，蛋白质分子带负电荷成为阴离子。pH值离等电点越远，颗粒所带净电荷越多，泳动速度越快，反之越慢。因此，当分离某一蛋白质混合物时，应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差异的pH缓冲液。
电泳时，正负电极接线要随pH变化而变化。如在碱性条件下，蛋白质带负电荷，正极应接在远离加样品的一方，以使蛋白质在支持介质上定向迁移。
三、支持介质：
多数电泳都有支持介质，如纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳等。支持介质的结构和性质对带电颗粒的泳动速度影响很大，主要表现为对样品的吸附、产生电渗和分子筛效应。
1、吸附：
支持介质对样品的吸附使带电颗粒泳动过程中的摩擦力增大，导致泳动速度减慢，峰拖尾，分辨率下降。
2、电渗：
电场中的液体相对于支持介质的移动称为电渗。如在纸电泳中，由于组成纸的纤维素带负电荷，使与纸接触的水层带正电荷（H3O+），使溶液在电场作用下向负极移动，并带动样品向负极移动。如果颗粒原来带正电荷，向负极移动，由于电渗使颗粒移动得更快，反之变慢。纸和淀粉等支持介质的电渗现象明显，醋酸纤维薄膜和聚丙烯酰胺凝胶的电渗较小。
3、分子筛效应：
分子筛是凝胶电泳的特性。用来作电泳的凝胶是有弹性且有网状结构的半固体物质，具有分子筛作用，使小颗粒易透过，而大颗粒不易透过。凝胶的分子筛效应对样品分离有利。
