基 本 方 案 1 用非变性去垢剂裂解细胞制成的悬液进行免疫沉淀材 料未标记或标记的细胞悬液 P B S ，冰预冷 非变性裂解缓冲液，冰预冷 5 0 % (V A O protein A-Sepharose 填 料（Sigma， Amersham Pharmacia Biotech)保存于含 0.1% (m /V ) B S A 和 0,01% (m /V ) 叠 氮 钠（N a N 3) 的 PBS 溶液中 特异性的多克隆抗体（抗血清或亲和层析纯化的免疫球蛋白）或 单 克 隆 抗 体（腹水 、细胞培养上清或纯化的免疫球蛋白） 特异性抗体的对照抗体（如免疫前血清或制备特异性多克隆抗体纯化的无关免疫球蛋白、无关腹水、杂交瘤培养上清或制备特异性单克隆抗体纯化的无关免疫球蛋白） 10 % (m /V ) B S A 洗涤缓冲液，冰预冷 转子角度固定的微量离心机（Eppendorf 5415C 或相似类型） 试 管 旋 转 器（能够来回颠倒） 连接真空抽滤装置的巴氏吸管 1.将细胞悬液（0.5X 107〜2 X 107 个 细 胞 获 得 I m l 裂解液）放 入 一 个 15m l 或 50m l 带螺帽的锥底离心管中 4°C ， 400 g 离 心 5 min。将试管置于冰上，用连接真空抽滤装置的巴氏吸管吸出上清液。 2 . 轻拍试管底部重悬细胞。冰 预 冷 P B S 如 步 骤 1 所述清洗细胞两次，所 用 P B S 的体积与原先的细胞培养体积相同。
 3 . 加 入 I m l 冰预冷的裂解缓冲液至 0.5X 107〜2 X 107个细胞，用中等速度旋转混合器轻 轻 旋 转 试 管 3s，重 悬 细 胞 沉 淀 。将 细 胞 悬 液 冰 浴 15〜 30m i n 后 ，转移至一个1.5m l 锥底微量离心管中。 4°C ， 16 OOOg (最大转速）离 心 15m i n 澄清裂解液。为了减少免疫沉淀的背景，如果需要，可将裂解液 10 超速离心 lh。 4 . 用安装了一次性吸头的可调节吸管将上清液转移至一干净的微量离心管中。不要搅动沉淀，并 残 留 20〜40ul 上清液在离心管中。将澄清的裂解液冰浴直到预清除（步
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