总蛋白染色剂替代丽春红S用于荧光Western Blots的优势
丽春红S是一种快速，可逆的蛋白质染色剂，通常用于确认蛋白样品是否成功地从凝胶转移到膜上，然后研究人员进行免疫印迹过程。 转印后对膜进行染色可以在用抗体孵育印迹之前快速且容易地识别一些转印的问题，例如由于存在气泡而导致的条带不完全、不均匀的转移和伪影。 此外，染色膜上的总蛋白为总蛋白标准化定量提供了标准。
然而，尽管丽春红染色是可逆的，但它与荧光Western印迹检测不相容。 即使在彻底脱色后，丽春红染色也会在膜上留下自发荧光残留物，增加背景荧光。
下图显示了多色荧光蛋白印迹。 右半部分使用丽春红染色，然后在免疫印迹前进行脱色。
然后用Azure Fluorescent Blot Blocking Buffer封闭两半印迹膜，并使用如图中标记的四种不同荧光探针检测四种蛋白。使用Azure cSeries RGB模块对印迹进行成像， 尽管彻底脱色，但在用丽春红染色的一半印迹上看到非常高的荧光背景。
下图显示使用Azure cSeries NIR模块拍摄的相同印迹，该模块评估了700nm和800nm通道。 在NIR成像印迹中荧光背景减少，但与未染色的一半印迹相比仍然具有高背景。
为避免由于丽春红染色导致的高背景，可考虑使用其他总蛋白质染色剂.2 AzureRed荧光总蛋白染色与下游Western印迹检测完全兼容，包括荧光检测和下游质谱。
AzureRed荧光蛋白染色是荧光western blotting定量的理想选择。宽广的线性动态范围确保AzureRed成为解决蛋白上样变化的有效标准。 AzureRed的一个关键特性是将其融入现有western blotting工作流程的简单性（图3）。
图3.使用azurered进行的总蛋白质标准化很容易适合任何蛋白质印迹工作流程
AzureRed染料可与常用荧光探针同时检测，无干扰，允许在一张印迹膜上评估多种蛋白质。使用AzureRed可以进行多色印迹的总蛋白质标准化，不需要剥离和脱色，可以在一张印迹膜上定量多种蛋白（图4）0。 该方法快速，可以与感兴趣蛋白一同成像。有关AzureRed荧光蛋白染色的更多信息，请访问www.azurebiosystems.com。
图4.AzureRed与三种感兴趣的蛋白同时成像。
向凝胶中加入稀释的HeLa细胞裂解物。转印后，将印迹用AzureRed染色，然后在不脱色情况下加入tubulin，ß-actin和GAPDH探针。用Sapphire 双模式多光谱激光成像系统扫描成像。四个通道进行叠加，总蛋白质（AzureRed染色）以灰色显示;tubulin-红色，ß-actin-蓝色和GAPDH-绿色
