蛋白质印迹法实验结果没有阳性条带或条带很弱的原因
①目的蛋白质未充分转移到膜上或洗膜过度,应使用丽春红S染色以检查转膜效果,或减少洗膜次数,缩短洗膜时间;
②抗体不匹配或一抗过期或一抗不能识别变性或还原的蛋白质,应注意选择特异性的抗体并在有效期内使用,或改用非变性凝胶系统;
③抗体浓度低,应适当增加抗体浓度,或延长孵育时间;
④样品中的目的蛋白质含量低或没有目的蛋白质,应增加上样量;
⑤封闭过度,应更换封闭液,缩短封闭时间。
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①目的蛋白质未充分转移到膜上或洗膜过度,应使用丽春红S染色以检查转膜效果,或减少洗膜次数,缩短洗膜时间;
②抗体不匹配或一抗过期或一抗不能识别变性或还原的蛋白质,应注意选择特异性的抗体并在有效期内使用,或改用非变性凝胶系统;
③抗体浓度低,应适当增加抗体浓度,或延长孵育时间;
④样品中的目的蛋白质含量低或没有目的蛋白质,应增加上样量;
⑤封闭过度,应更换封闭液,缩短封闭时间。