水生动物病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒使用说明
水生动物病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒
一、简介
水生动物病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒适合于快速从水生动物组织匀浆液中提取高纯度的病毒基因组核酸。试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提，也无需进行耗时的醇类沉淀，获得的核酸可直接用于PCR/RT-PCR、Sorthern杂交/Northern杂交、以及LAMP/RT-LAMP等系列下游实验。
原理
本试剂盒采用的硅胶柱以高结合力的玻璃纤维滤膜为基质。滤膜在高浓度离子化剂(如盐酸胍或异硫氰酸胍)条件下，可通过氢键和静电等物理化学作用吸附核酸，而蛋白质和其它杂质则不被吸附而去除。吸附了核酸的滤膜经洗涤去除残留的蛋白质和盐，最后可以用DEPC处理水洗脱滤膜上吸附的核酸，得到的核酸纯度高，可直接用于各种下游实验。
水生动物病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒基于硅胶柱纯化方式。样品在裂解液中裂解，核酸释放到裂解液中。在高盐的环境下通过硅胶柱，核酸被吸附在硅胶柱的膜上，而蛋白质则不被吸附而去除。后经洗涤液洗涤去除盐分，最后核酸被无核酸酶洗脱液洗脱。
三、组成
| 071011M | |
组分 | 含量 |
管A | 48个 |
管B | 48个 |
裂解液 | 30ml |
洗涤液 | 10ml |
洗脱液 | 36ml |
说明书 | 1份 |
注意：洗涤液在初次使用前加入40ml无水乙醇，并于室温保存。
四、保质期
水生动物病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒组份可在室温下（15-25℃）干燥保存12个月。长期保存时需置于2-8℃。
五、需要准备的材料和工具
无菌生理盐水
无水乙醇
洁净的镊子和剪刀
匀浆机、均质袋或一次性研磨棒
微量移液器（100-1000μl，10-100μl）
无DNase和RNase的灭菌离心管（1.5ml或2ml）
无DNase和RNase的灭菌Tip头
涡旋振荡器
离心机（转速≥10,000rpm）
六、从水生动物病毒中快速提取DNA/RNA的方法
该方案采用离心操作，适合于快速从水生动物组织样品中提取病毒基因组DNA/RNA。以下步骤都在室温下进行。
取适量待检新鲜样品组织加入1~5倍体积的生理盐水进行匀浆。取至少500μl匀浆液至1.5ml离心管中。
10,000rpm离心5min去除宿主细胞组织核酸。
取100μl上清液至新的离心管中，加入300μl裂解液至上清液中，颠倒混匀，静置5-10min裂解病毒。
加入200μl无水乙醇至裂解液中，涡旋混匀20秒。
把管 A装在2ml管B中，将裂解液全部转移至管 A中，10,000 rpm离心1min。
倒弃管B中的滤液，把管 A装回管B中，加入400μl洗涤液至管 A中，10,000 rpm离心1min。
重复步骤6。
倒弃管B中的滤液，把管 A装回管B中，10,000rpm离心3min。
把管 A装在新的1.5ml离心管中。
加入30-50μl洗脱液至管 A中，静置1-2min，10,000rpm离心1min，所得溶液即为病毒基因组核酸溶液。若暂时不用，于-80℃储存。
七、常见问题解答
该列表可能有利于您解决在提取过程中所碰到的问题。若您对试剂盒存在疑问或有良好的建议，又或者您在分子生物学实验中碰到问题，都请您联系我们。我们将竭尽所能为您排扰解难。
现 象 | 原 因 | 解 决 方 法 |
核酸产量低或无 | 样品被反复解冻 | 避免反复冻融样品。推荐使用新鲜样品或只解冻过一次的样品。 |
样品中病毒滴度太低 | 用小量浓缩柱浓缩病毒样品或提高样品的用量。 | |
样品匀浆不充分或裂解不充分 | 充分匀浆样品，适当延长裂解时间。 | |
洗涤液没有加入乙醇稀释 | 初次使用前，洗涤液必须加入无水乙醇进行稀释 | |
核酸下游应用结果 不理想 | 核酸浓度太低 | 减少洗脱时DEPC水的用量以提高核酸的浓度。 |
核酸产量太低或无 | 参见上面 | |
乙醇污染 | 确保按照说明书中的条件进行操作，如空柱离心时速度确保大于等于10,000rpm，离心时间为1min。 |
