DFbg在临床的实际应用
摘要 目的 初步探讨测定纤维蛋白原的PT衍生法（PT-der法）与免疫比浊法之间的关系及在临床的应用。方法 取1876例标本分别用PT-der法与免疫比浊法测定纤维蛋白原；取纤维蛋白原浓度高、中、低值样本用两种方法重复检测20次。结果 PT-der法与免疫比浊法呈线性相关，两者的关系可用Fbg=0.3086*DFbg+1.9543表示，计算得的Fbg与免疫比浊法所测得的值两者差异无显著性意义。结论 在纤维蛋白原正常参考范围内或轻度异常时，可以PT-der法与免疫比浊法的关系公式计算Fbg，但结果比较异常时，计算值与比浊法测得结果差异较大。
关键词 PT-der法；纤维蛋白原；免疫比浊法
纤维蛋白原即凝血因子Ⅰ，是止血血栓领域中最先发现的一个凝血蛋白，也是凝血过程中的主要蛋白，文献报道过和临床中应用的检测方法有很多种，有冯·克劳斯法（von Cluass法）、PT衍生法、免疫比浊法等等。由于目前国内大型血凝仪的普及，和PT-der法具有简便、快速和较高精密度等优点[1]，以克劳斯法测定纤维蛋白原（Fibrinogen,Fbg）成本较昴贵，目前国内临床上医院较常使用免疫比浊法来检测纤维蛋白原，因此希望探讨PT-der法与免疫比浊法关系，确定DFbg结果的可信性以及在临床上作为纤维蛋白原检测筛选试验的可行性。
材料与方法
1. 仪器：OLYMPUS AU600全自动生化分析仪和日本SYSMEX CA1500全自动血凝分析仪。
2. 试剂：纤维蛋白原测定试剂盒（上海复旦张江生物医药有限公司，批号010301），凝血酶原时间试剂盒（DADE BEHRING公司THROMBORAL®S，批号505509）。
3. 标本：收集佛山市中医院2001-03-01至2001-05-31住院病人（主要为骨科病人）抗凝（109mmol/L枸橼酸钠0.2ml抗凝全血1.8ml）血浆1876例，年龄最大100岁，最小1岁，平均年龄为45.8岁。
4. 方法：
4．1纤维蛋白原测定方法：分别以PT-der法与免疫比浊法对每个样本作纤维蛋白原测定。
4．2据纤维蛋白原浓度收集多个样本，分高值、中值、低值，每份样本用上述两种方法重复检测20次。
5．数据：推导PT-der法与免疫比浊法之间的线性回归关系；用配对资料t检验，检验计算值Fbg与免疫比浊法测Fbg结果差异是否有显著性意义。
结果
1. 佛山市中医院2001-03-01至2001-05-31间住院病人1876例。SYSMEX CA1500检测的DFbg与OLYMPUS AU600检测的Fbg比较，可以得出Fbg =0.3086*DFbg+1.9543。据公式计算Fbg值与生化仪测得Fbg作配对资料的T检验，标准差为0.2767,p值>0.05，差异无显著意义，相关系数r=0.872，相关性良好。
图1 DFbg与Fbg的关系（Fbg=0.3086*DFbg+1.9543）:
2.
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收集纤维蛋白原浓度高、中、低三种血浆，分别在OLYMPUS AU600上作免疫比浊法重复20次的检测和CA1500仪器上以PT-der法测定20次，根据两样品均数的比较，得知用公式计算得出的Fbg值与用生化仪实际检测的Fbg值差异没有显著性意义。
表1 对高中低值标本用两台仪器重复检测20次所得数值分析：
组别 | F1 | F2 | F3 | F4 | F5 | F6 | F7 | F8 | F9 |
平均值 | 4.247 | 2.712 | 1.604 | 3.695 | 2.878 | 2.430 | 3.452 | 2.792 | 2.452 |
标准差 | 0.220 | 0.165 | 0.101 | 0.074 | 0.058 | 0.073 | 0.068 | 0.051 | 0.031 |
t值 | 3.591* | 2.261* | -0.081** |
注：F1/F2/F3：分别为高、中、低值血浆在血凝仪上所测得的DFbg值。
F4/F5/F6：分别为高、中、低值血浆在生化仪上所测得的Fbg值。
F7/F8/F9：分别为根据F1/F2/F3计算得出的Fbg值。
*：F4与F7进行两样本均数T检验所得的t值,P值>0.05。
**：F5与F8、F6与F9两样本均数T检验所得的t值,P值>0.5。
讨论
随着越来越多的医院取消BT、CT检查项目，凝血功能检查逐渐被PT、APTT、Fbg、INR等项目取代，更客观地反映患者的内、外源、共同途径凝血系统功能。Fbg是血浆中量最多的凝血因子,其血浆浓度为1. 7～4.1g/L，平均2.9g/L，是肝脏合成的二聚体结构的蛋白质，其与血浆凝固有关。纤维蛋白原在凝血过程中，经凝血酶作用生成纤维蛋白单体，后者经聚合，并在ⅩⅢ因子和钙离子存在下转化成纤维蛋白细丝，形在互相交织的纤维蛋白网，使红细胞、白细胞和血小板包罗其中而形成血块。[2]
Fbg的常用检测方法有CLUASS法、PT衍生法、免疫比浊法、纤维蛋白比色法、凝血酶凝固时间法、盐析分离比色法、盐析分离比浊法等。由于全自动血凝仪的广泛使用，在全世界范围内应用最广的是CLUASS法，是美国及国家临床检验标准委员会（NCCLS）推荐方法，不受黄疸、脂浊、溶血等因素影响，结果较可靠，但是由于Fbg的异质性，纤维蛋白降解产物及抗凝物质使检测结果偏低，在PDP、D-D增高的异常血浆标本中有显著差异，CLUASS法结果低于PT衍生法[3] 。且试剂比较昂贵，在国内暂时难以普及。故很多医院检测Fbg时宁可采用可在生化仪上作检测的试剂较便宜的免疫比浊法。但是免疫比浊法特异性不强，且正常范围内，免疫比浊法高于CLUASS法；在高值范围，则低于CLUASS法，在低值范围却又明显低于CLUASS法。免疫比浊法测定结果多局限在1.0～5.0g/L之间[1]。而PT衍生法是血凝分析仪检测PT的同时，根据加入凝血酶原试剂后，纤维蛋白形成过程中的吸光度变化（0%～100%）与纤维蛋白原浓度成直线性关系的原理，计算衍算纤维蛋白原（DFbg）。此方法快速、简便且精密度较高，当Fbg会含量在正常范围或轻度异常时与CLUASS法无异，但是在Fbg含量<0.6g/L或结果异常时结果往往偏高[1]。
为了更好地应用PT衍生法测定纤维蛋白原，修正误差，初步探讨与免疫比浊法之间的关系显得很有必要。DFbg与免疫比浊法检测的Fbg存在着一定的关系，经过对1876例病人的血浆标本的分析，得出了Fbg =0.3086*DFbg+1.9543。再经过对高、中、低值三个样品的20次重复测试，作单样本的t检验分析和两组样本均数t检验，计算得出的Fbg与生化分析仪上测Fbg值比较，相关性良好，r=0.872,两者差异没有显著性意义。所以只要在仪器上作了PT的检测，得出DFbg值，就可计算出接近免疫比浊法的Fbg含量了。
实际在临床上的应用中，大部分骨折病人的血浆标本以此公式推算纤维蛋白原浓度是可行的。可是某些脑梗塞、高血压、糖尿病患者的纤维蛋白原测定，虽然这部患者血浆中的纤维蛋白原本来就比较高，但以PT衍生法所得的DFbg值远远大于免疫比浊法，相差甚至3～5g/L，用公式法计算得的值位于二者之间，这种情况建议以CLUASS法复查标本。有人提出要确定本公式法中的Fbg值的“线性范围”，超过或少于此“线性范围”则采用其他方法测定作对照，以确定结果的可信性。从公式本身可以看出，由于公式截距为1.9543，故纤维蛋白原浓度少于或很接近1.9543的标本，以此公式的可信性不强；而浓度大于多少，标本才须稀释或以其他方法检测则须作进一步的研究才可确定。但是公式法有它的优点：不仅结果与免疫比浊法较一致，且由于在检测凝血酶原时间时便可给出DFbg数值，可快速计算得纤维蛋白原浓度，在急诊、手术前凝血功能检验中可以争取宝贵的时间，而且可以节省试剂。所以公式法在临床中可作为筛选试验，如发现异常结果，必须以其他检测方法作进一步的测定。
使用公式过程中，发现了一个有趣的现象：就是如同免疫比浊法与CLUASS法之间的关系一样，在正常范围内，免疫比浊法高于公式法；而在高值范围，则低于公式法，在低值范围却又明显低于公式法。据此现象推测，可能公式法比PT衍生法与CLUASS法更接近。
参考文献
[1]程峰,朱忠勇,王丹等,5种纤维蛋白原测定方法的比较,临床检验杂志,2000,18(1):12-14.
[2]冯仁丰,实用医学检验学.上海科学技术出版社,1996:315
[3]王明山,谢海啸,陈晓东,纤维蛋白(原)降解产物对凝固法测定纤维蛋白原的影响,临床检验杂志,2001,19(3):167-168.
