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大分子物质的水解实验

2020.8.18

实验方法原理 水解过程可通过底物的变化来证明,如细菌水解淀粉的区域,用碘测定不再产生蓝色;水解明胶可观察到明胶被液化;脂肪水解后产生脂肪酸改变培养基的pH,其中的中性红指示剂使培养基从淡红色变为深红色。

实验材料 金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌大肠杆菌绿脓杆菌

试剂、试剂盒 油脂培养基淀粉培养基明胶培养基卢戈氏碘液

仪器、耗材 无菌平皿接种环接种针

实验步骤

1.  油脂水解试验


(1)将溶化的油脂培养基冷至45℃左右时,充分振荡,使油脂均匀分布,用无菌操作倒入平皿中,待凝。


(2)将制成的平板用记号笔划成两半,一半接种金黄色葡萄球菌作为对照,另一半接种枯草芽孢杆菌作为试验菌,均用无菌操作画“+”接种。


(3)将接种的平板倒置于37℃温室中培养24小时。


(4)取出平板,观察平板底层长菌的地方,如出现红色斑点,说明脂肪被水解,为阳性反应。


2.  淀粉水解试验


(1)将淀粉培养基溶化后,冷至45℃左右,以无菌操作制成平板。


(2)用记号笔将平板划成两半,一半接种大肠杆菌作为试验菌,另一半接种枯草芽孢杆菌作为对照菌,均用无菌操作划线接种。


(3)将上述已接种的平板倒置于37℃温室中培养24小时。


(4)将已培养24小时的平皿取出,打开皿盖,滴加少量卢戈氏碘液于平板上,轻轻旋转平皿,使碘液均匀铺满整个平板。如菌苔周围出现无色透明圈,说明淀粉已

被水解。透明圈的大小、说明该菌水解淀粉能力的强弱。


3.  明胶液化试验


(1)取三管明胶培养基,用记号笔标明各管接种的菌名。分别以无菌操作用接种针穿刺接种大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、绿脓杆菌。


(2)接种后,置20℃温室中培养2~5天。


(3)观察明胶培养基液化情况。

 

4.  将结果填入下表。“+”表示阳性;“-”表示阴性。


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