荧光酶免疫分析筛选方法检测沙门氏菌的原理
一、简介
荧光酶免疫分析筛选方法是在 EIA 基础上加入荧光标记的酶底物,用荧光计检测荧光度值来判断结果。AOAC989.15方法食品中沙门氏菌单克隆酶免疫荧光和比色筛选法(Q-Trol)》即为此方法。
AOAC 公定方法 989.15是用于对存在于所有食品中沙门氏菌的推定方法,因为试验中使用的单克隆抗体可与少数非沙门氏菌产生交叉反应,故不是一个确证试验。
用酶免疫分析(EIA)法测到的阳性样品增菌肉汤和M肉汤必须按常规标准方法划选择性平板对典型或可疑菌落进行鉴定。
二、原理
此方法是基于 EIA 测定食品中沙门氏菌抗原。沙门氏菌抗原的单克隆抗体附着在塑料微量板小孔的内表面上。将待检样品加到微量板的孔中,如果样品有沙门氏菌抗原存在,它们就与吸附在孔穴表面的抗体结合,样品中的其他物质则被冲洗掉。
加入与碱性磷酸酶接合的沙门氏菌抗体。如果其与附着于孔表面吸附的抗体上的沙门氏菌抗原结合,这就形成了抗体抗原抗体复合物。洗去没有结合的接合剂,加入荧光( FS 检测)或黄色底物,用荧光计( FS 检测)或3种比色法之一:①光度计自动检视终点(ME)检测,以可见光终点分析检视结果;②以目测将不透明孔的颜色与比色卡相比较[橘红色至暗红色部分被认作阳性(Ⅵ 检测)];③在 VI 分析后,将 VI 检测孔中的部分溶液移人清洁的微量板的孔中,用光度计检视终点颜色(VR 检测)。样品的临界值(out off value)大于或等于所建议的临界值即被认作沙门氏菌抗原阳性。
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