染色体制片
实验概要
掌握染色体制片的基本程序。
实验步骤
1. 取对数生长期细胞一个。
2. 将培养基换成10mL DMEM(H) 10%FBS 0.1μg/mL秋水仙素的培养基，处理1~2小时。
3. 将细胞培养液倒掉，马上加入3~4mL 0.1%胰蛋白酶，并立即摇晃0.5~1min。当在显微镜下看到分裂相细胞脱壁后，马上加入终止液终止消化，并将分裂相细胞收集在一个15mL的离心管中，并在1200r/min离心4min。
4. 将上清液倒掉，剩余50μL左右的液体在管中，并轻微震动，使细胞沉淀重新悬浮。
5. 加入10mL的低渗液(0.075M KCL)，第一毫升要逐滴加入，并边加边摇晃。
6. 37℃水浴中低渗30min。
7. 再加入1mL冰冷的固定液(甲醇：乙酸=3：1 的混合液)，并马上摇匀，离心，1000r/min、10min。
8. 同步骤4。
9. 加入10mL冰冷的固定液，第一毫升要逐滴加入，边加边摇晃。
10. 室温下固定30min，然后离心，1000r/min、10min。
11. 同步骤4。
12. 加入10mL冰冷的固定液，第一毫升要逐滴加入，边加边摇晃。
13. 室温下固定15min，然后离心，1000r/min、10min。
14. 重复步骤11~13一次。
15. 将离心后的上清液倒掉，并加入50~100μL的新鲜固定液重悬细胞。
16. 滴片(玻片要求是湿冷的干净的，滴片高度要大于30cm。玻片倾斜角度15~30度左右)
17. 镜检。
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