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离子交换层析实验——基本方案

2019.3.28

离子交换层析（Ion Exchange Chromatography简称为IEC）是以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。

实验材料	蛋白质
试剂、试剂盒	离子交换缓冲液
仪器、耗材	离子交换层析柱梯度混合器电导表
实验步骤	1. 配制离子交换层析缓冲液，安装好层析柱，但以离子交换层析缓冲液取代其中的凝胶过滤缓冲液。图一、用于蛋白质离子交换层析的梯度混合仪器 2. 用起始梯度的缓冲液溶解含蛋白质混合物的样品。 3. 弃去柱床上部的大部分缓冲液，并将样品加在凝胶的顶上。只要样品的离子强度不超过起始缓冲液的离子强度，上样体积不限。 4. 让样品流入凝胶柱床，并用缓冲液冲冼层析柱的内壁，用吸管往凝胶的顼上加一层1 cm 高的缓冲液。 5. 连接梯度混合器，分部收集100个级分，每个组份相当于约1%总禅度体积。测各组分的A₂₈₀以确定蛋白峰的所在，用电导表测离子强度以确定禅度的形状。展开

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