两种酶的反应缓冲液不一样,做双酶切时如何处理
如果是分开酶切的话,第一个酶切完成后要回收(可用醇回收,效率比较高)后,再进行第二次酶切。
做转化的时候,进行酶连接反应时,注意保持低温状态,因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见,一般连接3小时,16度;对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时,注意加AMP时的温度,温度过高,会使克隆株无法筛选出来。
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如果是分开酶切的话,第一个酶切完成后要回收(可用醇回收,效率比较高)后,再进行第二次酶切。
做转化的时候,进行酶连接反应时,注意保持低温状态,因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见,一般连接3小时,16度;对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时,注意加AMP时的温度,温度过高,会使克隆株无法筛选出来。