含乳食品中常用防腐剂和甜味剂同时检测方法的研究

2019.9.12

方案优势

六种化合物的线性关系良好，相关系数为0.9991～0.9998，实现了20min内对六种化合物的同时测定。

采用标准

方法/原理/步骤

　　样品处理

　　称取2～3g粉碎均匀的样品，加水15mL，超声振荡5min，取出后加入2mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入2mL乙酸锌溶液，摇匀，用氢氧化钠溶液调pH值约为7，用水定容到25～50mL，4 000r/min离心5min，取上清液经0.45μm水系滤膜过滤，供高效液相色谱测定。若样品中含有较多的脂肪时，可将定容好的样液转移到分液漏斗中，加入正己烷10ml,振摇1min,静置分层，弃去正己烷层，再加入10mL正己烷重复提取一次，取下层水相置于离心管中，4 000r/min离心5min，取上清液经0.45μm水系滤膜过滤，供高效液相色谱测定。

　　高效液相色谱检测条件的确定

　　试验方法

　　1.检测波长的选择

　　经紫外光谱扫描190～400nm波段，得出六种物质的最大吸收波长分别为：乙酰磺胺酸钾(安赛蜜)226nm，糖精钠202nm，阿斯巴甜208nm，苯甲酸226nm，山梨酸257nm，脱氢乙酸230nm、293nm。故选择205nm作为这六种食品添加剂同时测定的波长，在波长205nm下各物质灵敏度相近，基质干扰少，样品前处理相对简单，可简化日常工作，缩短检测时间，提高检测效率。

　　2.流动相及流动相比例的选择

　　查阅文献及现行有效的国家标准，在测定防腐剂和甜味剂时采用的流动相多是甲醇和乙酸铵。试验发现单独选用甲醇与乙酸铵或乙腈与乙酸铵时，六种化合物中的糖精钠与阿斯巴甜都不能得到良好分离。试验采用甲醇：乙腈：0.01mol/L乙酸铵做流动相，发现三种试剂的不同比例对分离度、峰形、灵敏度影响较大。有机相含量低时，标准物质出峰时间长；有机相含量高时，标准物质出峰时间缩短。选用0.01mol/L乙酸铵与甲醇、乙腈比例为(95:1:4)、(94:2:4)、(93:3:4)的流动相进行等度试验，结果表明，当0.01mol/L乙酸铵与甲醇、乙腈的比例为93：3：4时，各待测物质都能得到较好的分离，分析时间适中。

　　标准曲线的测定

　　1.苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、安赛蜜、糖精钠、阿斯巴甜混合标准使用液的配制

　　分别吸取苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、安赛蜜、糖精钠、阿斯巴甜标准储备液(浓度为1.0mg/mL，由国家标准物质中心购买)0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL于10mL容量瓶中，加水至刻度，即得含苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、安赛蜜、糖精钠、阿斯巴甜10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL的标准使用液系列。用0.45μm水相微孔滤膜过滤，待测。

　　2.高效液相色谱条件

　　色谱柱：Agilent C18液相色谱柱；流动相：乙腈：甲醇：0.01mol/L乙酸铵为4：3：93；流速：1.0mL/min；柱温：30℃，进样量：10μL；检测器：紫外检测器，波长205nm。按以上色谱条件将六种物质的混合标准使用液进行色谱分析，以保留时间定性，峰面积外标法定量。