人绒毛膜促性腺激素检测实验步骤
概述
人促绒毛膜性腺激素(hCG) 是一种糖蛋白类激素，由胎盘分泌而得，与垂体类激素FSH、TSH及 LH的结构类似。它的α亚单位（分子量15，000~20，000道尔顿）与这些激素完全相同，但β亚单位不同，表现出不同的免疫性和生物活性。β亚单位（分子量25，000~30，000道尔顿）的多肽序列与LH的β链有一些相似之处，但在羧基端末的区域是其独有的。
在受精卵进入到子宫着床后不久，滋养层就开始分泌hCG 。该激素保持黄体释放类固醇激素，直到胎盘可释放类固醇激素为止。在正常妊娠过程中，受精卵着床后一周后一般血清hCG 浓度就可达到50 mIU/ml (IU/l) ，6周内每隔1.5~3天即可翻倍。在妊娠的前三个月内hCG 浓度持续升高，然后慢慢下降，直到妊娠结束，生产后，hCG 浓度回复到< 5 mIU/ml (IU/l)，通常在几天后就可达到不可测的低值。
该激素是妊娠的绝佳标志物，健康人和未妊娠个体血清中的hCG 通常< 5 mIU/ml (IU/l)，在妊娠期间，hCG 浓度如上述进行变化，不正常的出现低值或提前出现浓度大幅度的下降提示出现不正常的状态如宫外孕或先兆流产。
最初的生物学方法通过测定不同动物的性腺器官的反应来测定hCG ，这些方法灵敏度差、难以操作并且需要大量的样品。传统检测尿液中hCG 的方法是胶乳凝集或凝集抑制实验，随着科学技术的发展，在1972年，Vaitukaitis 等发展了放射免疫的技术来检测hCG，使得更灵敏、更快速的检测hCG成为可能。随后建立的双位点免疫放射分析使检测更灵敏、特异和精确。
临床意义
HCG的检查对早期妊娠诊断有重要意义，对与妊娠相关疾病、滋养细胞肿瘤等疾病的诊断、鉴别和病程观察等有一定价值。
1．诊断早期妊娠：孕后35～50天HCG可升至大于2500 IU/L。60～70天可达80000 IU/L，多胎妊娠者尿HCG常高于一胎妊娠。
2．异常妊娠与胎盘功能的判断：
① 异位妊娠：如宫外孕时，本试验只有60%的阳性率，在子宫出血3天后，HCG仍可为阳性，故HCG检查可作为它与其它急腹症的鉴别。HCG常为312～625 IU/L。
② 流产诊断与治疗：不完全流产如子宫内尚有胎盘组织残存，HCG检查仍可呈阳性；完全流产或死胎时HCG由阳性转阴性，因此可作为保胎或吸宫治疗的参考依据。
③ 先兆流产：如尿中HCG仍维持高水平多不会发生难免流产。如HCG在2500 IU/L以下，并逐渐下降，则有流产的或死胎的可能，当降至600 IU/L则难免流产。在保胎治疗中，如HCG仍继续下降说明保胎无效，如HCG不断上升，说明保胎成功。
④ 在产后4天或人工流产术后13天，血清HCG应低于1000 IU/L，产后9天或人工流产术后25天，血清HCG应恢复正常。如不符合这一情况，则应考虑有异常可能。
3．滋养细胞肿瘤诊断与治疗监测
① 葡萄胎、恶性葡萄胎、绒毛膜上皮癌及睾丸畸胎瘤等患者尿中HCG显著升高，右可达10万到数百万IU/L，可用稀释试验诊断如妊娠12周以前1：500稀释尿液呈阳性，妊娠12周以后1：250稀释尿液呈阳性，对葡萄胎诊断有价值。1：100～1：500稀释尿液呈阳性对绒毛膜癌也有诊断价值，如男性尿中HCG升高，要考虑睾丸肿瘤如精原细胞癌、畸形及异位HCG瘤等。
② 滋养层细胞肿瘤患者术后3周后尿HCG应<50 IU/L，8～12周呈阴性；如HCG不下降或不转阴，提示可能有残留病变，这类病例常易复发，故需定期检查。
4．其它更年期、排卵及双侧卵巢切除术均可致黄体生成素升高，因LH与HCG的α肽链组成相同而使采用抗HCG抗体的妊娠试验阳性，此时可用β～HCG的单医学教育 网收集 整理克隆二点酶免疫测定鉴别。内分泌疾病中如脑垂体疾病、甲状腺功能亢进、妇科疾病如卵巢囊肿、子宫癌等HCG也可增高。
标本采集
A. 血清是推荐的样品类型。
B. 遵循国家委员会制订的临床实验室标准推荐的以下标本处理、运行和储存步骤：
1. 用真空采样管采集所有血液标本时须遵守常规注意事项。
2. 离心前使标本完全自然形成凝块。
3. 全程保证样品管的密闭状态。
4. 离心获得血清后的两小时内，至少将500ul血清或血浆转移到一个密闭的储存试管中备用。
5. 储存样品，保持样品管完全密闭，在室温(15 到 30°C)条件下不超过8小时。
6. 如果8小时内不能完成检测即应将标本放入2 到 8°C冰箱冷藏。
7. 如果24小时内不能完成检测即应将标本放入-20°C冰箱冻藏。
8. 冻存标本在检测前可保存6个月。
9. 标本只可复溶一次。
样品中至多含有10mg/dl (171mol/l) 的胆红素和脂血标本中含有相当于1800mg/dl (20.32 mmol/l)的甘油三脂、 溶血标本含有最多500mg/dl(5g/l)的血红蛋白外不影响总βHCG检测的结果。另外，在标本中的内源性白蛋白基础上加入3 g/dl (30 g/l)的人白蛋白也不影响检测结果。
正常参考范围
1. 用Access 总βHCG 对收集到的表观正常的成人和非孕期妇女的血清进行检测并得到总βHCG 的数值，得到的检测范围如下所述，产品内页中将在正常参考范围内提供直方图。
2. 和所有诊断检测一样， 每个实验室均应针对各种有代表性的特殊人群建立自己的参考范围。
3. 正常孕期内的HCG范围表现概述如下 ，由于可能与其它的临床参考资料存在差异，因此建议各实验室建立自己的参考范围。
4. 参照WHO的第三次国际标准75/537对βHCG进行特异性检测
操作注意事项
样品可在可报告范围内即f 0.5–1000 mIU/ml (IU/l)被准确的定量，如果病人血清中的浓度低于可报告范围下限时，报结果为<0.5 mIU/ml (IU/l)。如果样品浓度高于检测线性的上限，报告结果为<>1000 mIU/ml (IU/l)。
含量 > 1000 mIU/ml 的标本也可通过下述的离机预稀释步骤进行稀释：
1. 用Access冲洗液将样品进行200倍稀释（1：199），或者也可用实验室规定的稀释程序进行梯度稀释。注意：用其它的缓冲液进行稀释可能会导致错误结果。
人抗大鼠抗体(HAMA)可能会出现在已接受大鼠源性单抗免疫药物治疗的病人体内(13，14)。这个分析方法已通过特殊的方法来尽量减少这些抗体对该分析方法的影响。但是，在已知病人含有这些抗体时须小心评估检测结果。
Access总βHCG检测浓度为1,000,000mIU/ml时未发现钩状效应。
