生物素酰化探针的检测实验
比色法
化学发光法
| 实验材料 | DNA |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | 磷酸酶缓冲液 封阻液 牛血清蛋白 TE NBT |
| 仪器、耗材 | 离心机 分光光度计 摇床 |
| 实验步骤 |
1. 用DNA稀释缓冲液，稀释生物素酰化标准DNA，浓度为0、1、2、5、10和20 pg/μl。以同样稀释液处理待测DNA。
3. 对于足龙膜：每个稀释度取1 μl 点膜，晾干后用紫外照射法将DNA交联至膜上。接步骤4或化学发光检测。
4. 用少量体枳AP7.5液沆膜1 min，在密封袋中（剪成合适大小），用10 ml 封阻液，37℃封闭1 h 注意排出气泡。
9. 加TE pH8.0以终止反应，比较测定DNA样品和标准DNA的颜色强度以确定生物素酰化dNTP的掺入效率。如果该探计至少有一半标准品的强度，它可作为探针用于原位杂交。
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