常用DAN探针制备的方法介绍--光敏生物素标记
光敏生物素标记(photobiotin labeling)是Forster(1985)等报道的核酸探针制备方法。光敏生物素是一种可用光照活化的生物素衍生物,它的乙酸盐很容易溶于水,在水溶液中将光敏生物素乙酸盐与需要标记的核酸混合,用强的可见光照射,就可将生物素标记在单链或双链的 DNA 或 RNA 上,形成稳定的共价结合。大约每100～150个残基结合一个生物素,这种程度的标记不会影响杂交。目前有许多跨国公司如美国的Sigma、西德的 Serva、澳大利亚的 Bresatec 等均有商品化光敏生物素,以及其标记探针试剂盒供应。我国马立等人也研制出了光敏生物素,并首次合成了带臂的光敏生物素,提高了检测灵敏度。与其他方法相比,用光敏生物素标记核酸,具有以下优点:
(1)方法简便易行、快速可靠、易于重复,不需特殊试剂,只需在水溶液中直接光照标记,因光照需要一定强度,马立等人已成功试制出光敏生物素光照标记用灯。
(2)适用面广,单链、双链 DNA 或 RNA 均可标记。
(3)标记核酸的量可从1μg 至数毫克。标记核酸量较大时,标记后探针呈橘红色,便于观察。
(4)探针稳定性好,20℃贮存至少可达12个月不变。
(5)标记后的探针只需用简单的乙醇沉淀法回收。
(6)标记物的检测灵敏度可达到1～5pg DNA。
(7)没有放射性污染问题,所以光敏生物素标记制备探针是具有很强生命力的标记方法。
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