生物素酰化探针的制备实验
切口平移法
随即寡核苷酸引物合成法
| 实验材料 | DNA |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | DNA聚合酶 dNTP 2-疏基乙醇 生物素 甘油 NaCl EDTA SDS 无水乙醇 |
| 仪器、耗材 | 注射器 电泳仪 离心机 培养箱 |
| 实验步骤 |
1. 混合以下物质于100 μl 反应体积：
3. 加样于琼脂糖凝胶，同时带对照分子量标准，在15 V/cm 电压降下电泳。
4. 消化的DNA大小介于100~500 bp 之间，接步骤5继续，若大小在500~1 000核苷酸之间（或更大）加入第二份DNA酶Ⅰ继续温育。
5. 加入2 μl，0.5 mol/l pH8.0的EDTA和1 μl 10%SDS，68℃加热10 min 终止反应和灭活DNA酶Ⅰ。
6. 在1 ml 注射器中准备如Sephadex G-50离心柱，用2 ml 无水乙醇清洗注射器和硅化的玻璃棉。
9. 用比色法估计生物素酰化反应的程度和探针的质量或进行化学发光检测。
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