裸眼筛选重组杆状病毒实验
实验材料 杆状病毒
试剂、试剂盒 琼脂糖
仪器、耗材 解剖显微镜倒置显微镜
实验步骤
解剖显微镜下筛选
1. 倒转蚀斑平皿，使其处于显微镜的黑色背景下，以锐角向平皿照射一束亮光。
2. 检查野生型病毒感染的细胞中含有包涵体的蚀斑，这种蚀斑看上去折光性强，带有轻微的黄色。
3. 检查β-gal 重组病毒感染的细胞中不含包涵体的蚀斑，其颜色呈灰色。
4. 圈出平皿中覆盖蚀斑的区域，以400×的倍数在倒置显微镜下检查圈出的蚀斑，以锻炼用裸眼分辨出每一蚀斑形态上的细微之处。
用倒置光学显微镜筛选
1. 将蚀斑平皿右侧稍抬起向上，以30×和40×的倍数检查每一类型的蚀斑。
2. 重组蚀斑带有桔红色，而野生型蚀斑由于包涵体的聚集而具有暗褐色外现。
3. 在显微镜下见到蚀斑时， 在平皿上蚀斑下的区域点一点，从显微镜下移去平皿，围出蚀斑。
4. 将平皿倒转放在显微镜载物台上并以400×的倍数观察蚀斑。
直接用裸眼筛选
1. 如果蚀斑形成较好，将平皿举过头顶，直接观察平皿底部，有可能从重组蚀斑中辨别出野生型蚀斑。
2. 野生型蚀斑周围的区域看上去呈灰白色，而重组的蚀斑则不会。
3. 用任一种上述方法鉴定出假定的重组病毒蚀斑后，挑取几个蚀斑，将琼脂糖块置于1 ml 无血清培养基中，在旋涡混合器上振荡混匀，病毒液可于4℃贮存数月备用。
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