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血管紧张素转化酶的注意事项及检查过程

2022.5.12

  注意事项

  1、三硝基苯磺酸钠(INBS)显色法:

  (1)标本在室温或冰箱存放1周,酶活力无明显变化,-15℃保存3周酶活性稳定。

  (2)胆红素对ACE有明显抑制作用,故重度黄疸可使测定结果偏低。EDTA是ACE的强抑制剂,NaCl和Na2SO4对ACE有明显的活化作用,溶血、脂血对结果无影响。

  (3)本法与紫外分光光度法酶活力单位一致,但其测得值为紫外法的9倍。

  2、酶偶联法:

  (1)当底物pH 8.0,GGCN 1.0mmol/L,GGT6.7ku/L时,ACE活性与吸光度值有良好线性。线性范围大,即使ACE在1500U/L,不用稀释也可获得理想结果。

  (2)GGCN浓度选择:本反应体系中GGCN既是测定酶ACE的受体,又是指示酶GGT的供体。以1.0mmol/L的GGCN最理想,在此浓度下GGCN与吸光度保持良好的线性。

  (3)GGT对测定的影响:本反应利用GGT将双甘肽与GGCN偶联,生成黄色的3-羧基-4-硝基苯胺,其加入量可直接影响测定结果。GGT高浓度可使底物过度消耗,使吸光度偏离曲线;低浓度GGT又使吸光度偏低,灵敏度不高。每次加入0.335 U GGT,可获得理想吸光度与线性。在此浓度下,酶基质液的空白管吸光度<0.1A。

  检查过程

  1、三硝基苯磺酸钠(INBS)显色法:取试管2支,标明空白管(B)和测定管(U),各加血清0.01ml,B管加试剂(1)、(3)、(4),U管加底物0.1ml,置37℃水浴30min;U管加试剂(3)、(4)各0.1ml,然后B、U管各加蒸馏水1.0ml,混匀;1500g离心10min,各取上清液0.75ml,分别加入试剂(2)1.0ml及TNBS 0.05ml,室温30min或37℃ 15min,用5mm比色杯,在420nm处,B管调零,读取U管吸光度。

  2、酶偶联法:取小试管4支,分别标明测定管(U),标准管(S),血清空白管(SB),试剂空白管(RB)。

  混匀,以双蒸馏水调零点,410nm波长比色,记录各管2min吸光度△A值。

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