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必须收藏！LC/MS分析灵敏度技巧宝典来了
世上宝典千千万，唯有适合自己的才是最实用的
当您使用LC/MS（液质）进行高灵敏度分析时，
有哪些技巧可以提高我们的检测效率呢？
LC/MS灵敏度差？检出限高？
怎么选溶剂最好？怎么选色谱柱合适？
做完实验结束了？
保养、储存、处理、清洁要怎么做？
接下来我们就将从六个方面为您详细分享，从前提、添加、核心、条件、保障、维护来介绍如何提高灵敏度。
进行任何高灵敏度分析的前提是使用超纯溶剂作为流动相，溶剂中的杂质可能会影响分析结果的准确性和可重复性。
LCMS溶剂专为满足LC-MS应用的严格要求而设计，可确保基线稳定性、最低的金属杂质含量和高紫外透射比, 分析结果更可靠。
溶剂的质量提供了最佳的先决条件，以确保优越的分辨率和灵敏度在LC-MS应用:
在LC-MS的流动相中加入某些试剂或者将试剂引到柱后的接口前以影响分析物离子化，是一种常规做法。这样做通常是为了改善分析信号。此外，还可以使用一些添加剂抑制干扰信号，或选择性增强混合物中特定化合物的信号。例如，肽混合物中的糖苷类。
LC-MS产品系列包括最常用的高纯度酸、碱和挥发性盐，均需经过LC-MS应用测试。改进剂包括酸（如甲酸），碱（如氨溶液）或缓冲剂（如乙酸铵），可用于质子化或去质子化分析。
| 货号 | 物质 | 描述 | 包装规格 |
| 5.33001.0050 | 醋酸 | 100%，用于LC-MS，LiChropur® | 50mL |
| 5.33002.0050 | 甲酸 | 98-100%，用于LC-MS，LiChropur® | 50mL |
| 5.33003.0050 | 氨溶液 | 25%，用于LC-MS，LiChropur® | 50mL |
| 5.33004.0050 | 醋酸铵 | 用于LC-MS，LiChropur® | 50g |
| 5.33005.0050 | 碳酸氢铵 | 用于LC-MS，LiChropur® | 50g |
使用缓冲剂来设定和控制色谱分离的PH值并使溶液中的分析物质子化或去质子化，可以支持电喷雾电离过程，对于LCMS，只能使用挥发性改进剂。但如果用铵，甲酸盐或乙酸盐可能会形成加合物，这会导致谱图中具有附加信号，会影响定量分析，因此，对于食盐，体液或组织等含盐量较高的样品，建议使用固相萃取(SPE)进行脱盐步骤（Supel™-Select HLB或Supelclean®滤芯）
如果要使用盐，要在使用之前对其分析，确定盐中是否存在以及存在什么类型的污染物，选择LCMS级别避免污染风险。
从色谱角度来看，MS是LC分析环节中的一种重要检测器；定性和定量分析的前提是基线分离，关键点在于采用的液相色谱柱的性能。对于LC/MS分析，色谱柱具备同样重要性。
默克旗下品牌Supelco®拥有种类丰富的液相色谱柱：常规液相色谱柱、生物色谱柱和手性色谱柱，可用于化药、生物药、食品、环境和化工等行业中相关物质的分析。
下面将从柱流失角度，为大家推荐适合的默克液相色谱柱，以获取理想的LC/MS分析结果：
硅胶基质的色谱柱填料，在酸性条件下会出现键合相水解，在碱性条件下会出现硅胶溶解，统称为柱流失现象，会提高基线噪声，降低检测灵敏度。
相对于传统的三甲基硅烷单点封尾技术，采用先进的封尾技术，可有效拓展色谱柱的pH适用范围，降低柱流失，提高LC/MS检测灵敏度。
Purospher® STAR是默克一款非常优秀的液相色谱柱，其采用硅氧键聚合封尾技术，将pH耐受范围有效拓展至1.5-10.5，几乎可以满足所有pH流动相的要求；硅氧键与水分子兼容性良好，色谱柱可耐受100%纯水相，适用于极性化合物的分析；采用超纯硅胶（金属杂质含量<5ppm），在对螯合化合物和碱性化合物进行分析时，可获得对称、尖锐的峰型。
默克旗下品牌Supelco®拥有的全多孔硅胶液相色谱柱系列：Discovery®和Ascentis®采用先进的硅胶表面处理技术，柱流失非常低，同样适用于LC/MS分析。
采用熔融核颗粒技术的Ascentis® Express（小分子分析）和BIOshell™（大分子分析）液相色谱柱硅胶表面处理技术传承自Ascentis®，满足柱流失低的情况下，可有效缩短分析时间，是加快LC/MS分析速度的一个重要选择。
对于采用反相分离模式的LC/MS分析，采用先进封尾技术和硅胶表面处理技术的硅胶基质液相色谱柱，是一种降低柱流失的常用方式。采用聚合物基质的液相色谱柱是另外一种重要选择：默克旗下品牌Supelco®拥有的apHera™系列液相色谱柱，采用聚乙烯醇基质，含有C18、C8、C4和NH2键合相，具备较大的孔径（300Å），可用于小分子和大分子的LC/MS分析，获取更低的柱流失和更高的检测灵敏度。
极性化合物的分析是一个重要的课题。对于反相分离模式，主要是采用耐100%纯水相的C18键合相的液相色谱柱。耐100%纯水相C18色谱柱的原理有以下3种：表面极性基团封尾（Purospher® C18）、硅氧键聚合封尾（Purospher® STAR C18）和极性基团嵌入（Discovery® RP-Aminde、Ascentis® RP-Amide和Ascentis® Express RP-Amide）。除反相分离模式外，另外一种重要的解决办法即是亲水分离模式：待分析的物质在流动相和填料表面的亲水层之间进行分配。因此亲水层的厚度影响HILIC分离模式的选择性、柱流失和柱载量。
默克旗下品牌Supelco®拥有的ZIC®-HILIC系列液相色谱柱，在亲水分离模式领域享有盛誉：采用两性亲水固定相，柱流失低，亲水层厚度远高于其他亲水分离模式液相色谱柱，具备高选择性（亲水分配与较弱的离子交换作用），孔径大（部分200Å）。亲水分离模式的流动相采用高比例有机相，离子化效率高，与MS匹配度高。
Ascentis® Express OH5和BIOshell™ Glycan两款液相色谱柱，采用独特的五羟基键合相，具备独特的选择性，在亲水分离模式下，可用于糖链等多羟基化合物的分析，会产生意想不到的惊喜。
相关样品的溶剂及试剂的储存和处理，选择合适的包装材料和密封盖，避免使用像增塑剂，抗静电剂，稳定剂或防滑剂等可以浸出添加剂的塑料装置，最佳是使用原始瓶中，尽可能避免倾倒，转移到不同容器过程中被污染。
LCMS中使用的所有试剂都是挥发性且高纯度的，所以清洁配套实验室设备和容器可以在通风橱中通过蒸发来完成。当发现污染时，首先要用专业清洗剂无残留清洗后，在使用MS级溶剂正确冲洗设备，关键就是要在洗涤后用MS级溶剂多次冲洗容器。
清洗可以选择专业Extran®,清洗剂不仅适用于手工清洁（MA），也适用于使用实验室清洁设备（AP）进行的机械清洁。
成分稳定如一，可确保实验工作流程的正确进行，避免实验流程和应用的频繁改动，无残留，环保健康。
LCMS系统合适的设置也助于提高灵敏度。考虑死体积的最小化，包括LCMS柱体积，及从注射器到检测器单元的所有系统部件的体积。较大的死体积会造成峰变宽，拖尾或分裂，导致分辨率降低和性能下降，因此可能降低灵敏度并无法检测低浓度分析物。所以所有系统部件（管道，连接器，接头）必须尽可能减小死体积。
每隔1到2个月更换一次泵入口的过滤器，或者将溶剂乙腈更换为甲醇（反之亦然）。这将降低基线噪声并保护系统和色谱柱不受泵碎屑的影响。
使用不锈钢或PEEK制成的洗脱液滤芯（来自溶剂入口过滤器），而不是玻璃制的。由于缓冲残渣难以除去，而二氧化硅和碱可能从玻璃过滤器中浸出并形成加合物，因此玻璃制的洗脱液滤芯是无用的。
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