【案例分享】LC-MS/MS在激素检测中的应用

沃特世

2021.5.07

激素作为内分泌系统的信使，发挥着调节机体各种生理活动、维持体内环境相对稳定的作用。准确测定体内激素水平是判断内分泌代谢是否紊乱与诊断分型的重要指标。然而，体内激素种类繁多，浓度差异极大，对于检测技术要求很高。

过去，常用免疫分析方法检测激素水平，但因为无法检测到部分激素的情况导致结果不理想。而LC-MS/MS因其更高的检测特异性和灵敏度，越来越受到关注。美国临床内分泌协会亦推荐采用质谱进行内分泌检测，免疫学方法渐渐从主流杂志中退场谢幕。

LC-MS/MS技术对临床检测具有重要意义，下面我们就看一下有关嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的诊断以及治疗检测的儿茶酚胺类激素。

儿茶酚胺类化合物

儿茶酚胺类化合物是肾上腺髓质分泌的激素，可以引起人或动物血压升高、心跳加快、血管紧张、代谢率提高、耗氧量增加等。儿茶酚胺(包括肾上腺素E、去甲肾上腺素NE和多巴胺DA)及其代谢物(变肾上腺素MN、去甲变肾上腺素NMN和3-甲氧基酪胺3-MT)在血浆中的浓度变化与许多病理过程息息相关，含量超标会引发高血压与心肌梗塞，含量过低则会导致低血压。临床上，儿茶酚胺类化合物可以用于辅助诊断高血压、甲亢、嗜铬细胞瘤、神经母细胞瘤等内分泌相关疾病，这类疾病如果不能得到及时治疗，最终会增加心血管疾病发病率和死亡率。

但是儿茶酚胺及其代谢物的极性较大、结构相近，而且在血浆中含量较低、干扰较大，传统的免疫法不能准确定量，必须采用先进的样品前处理方法和灵敏度更高、选择性更好的液相色谱串联质谱法进行定量分析。

图1.儿茶酚胺及其代谢物的结构式。

犹他州大学儿茶酚胺检测研究

犹他州大学的研究表明血浆中儿茶酚胺类代谢物的监测灵敏度达到100%，特异性达到97.6%。

图2.犹他州大学的研究结果图。

通过LC-MS/MS法不仅可以准确定量低浓度血液样本中的儿茶酚胺及其代谢物浓度，还可以同时检测尿液样本，不仅灵敏度高，而且快速、简便。前处理采用Oasis WCX μElution 96孔固相萃取柱快速净化富集血浆中E、NE、DA、MN、NMN和3-MT，再采用HSS PFP色谱柱分离，然后经Waters UPLC I-Class - Xevo TQ-S IVD超高灵敏度的三重四极杆质谱进行定量分析，色谱分离如下图。