应用案例 | BeaverBeads®在总三碘甲状腺原氨酸检测试剂盒(磁微粒化学发光)中的应用
三碘甲状腺原氨酸(3,5,3‘-triiodothyronine,T3)是甲状腺素在肝和肾中经过脱碘形成,是诊断甲状腺功能亢进症的特异性指标,可用于评价机体的甲状腺功能,对评估甲状腺功能亢进症有无复发也有重要参考价值。
总三碘甲状腺原氨酸检测试剂是指利用抗原抗体反应的免疫学检测方法对人血清、血浆中总三碘甲状腺原氨酸(TT3)进行体外定量检测的试剂。临床上用于甲状腺功能异常等的辅助诊断。总三碘甲状腺原氨酸检测方法主要有酶标记、(电)化学发光标记、(时间分辨)荧光标记等标记方法标记,以微孔板(管)、磁颗粒等作为载体。
磁微粒化学发光免疫分析是将纳米材料技术、磁分离技术、化学发光技术、免疫分析技术结合在一起的一种新兴检测方法。在众多的免疫检测方法中,磁微粒化学发光检测方法由于灵敏度高、特异性好、自动化程度高等特点在生物分析领域展现了不可替代的作用。
1 BeaverBeads®在TT3检测试剂盒中检测不同浓度梯度的标准品
各个浓度重复测定3次,得出3次测量结果的RLU值(相对发光值),计算其平均值(M),同时分析不同磁珠的发光值、梯度、本底发光值等指标。
表1.磁微粒化学发光检测结果(注:A:试剂盒中进口磁珠B:BeaverBeads)
TT3 | A | B | B/A(%) |
发光值(M) | |||
S0 | 1536434 | 1792779.7 | 116.68% |
S1 | 1186921 | 1362443.7 | 114.79% |
S2 | 835630.3 | 972195 | 116.34% |
S3 | 485245.7 | 557061 | 114.80% |
S4 | 171542 | 194670.3 | 113.48% |
S5 | 58257.3 | 65188.3 | 111.90% |
Ratio | 2.94 | 2.99 |
在TT3检测试剂盒中,原试剂盒磁珠和BeaverBeads®(磁珠推荐使用量0.25mg/ml,20ul)的拟合曲线相关系数R2达到0.995以上,均符合YY/T 1222-2014的要求(r大于0.99)。BeaverBeads®的化学发个信号与试剂盒中磁珠基本保持一致,信号值稍偏高,整体偏差控制在15%以内。BeaverBeads®的分离度Ratio值为2.99与试剂盒原磁珠2.94基本保持一致。
2 磁珠重复稳定性性验证
用高、低两种不同的样本各重复检测10次,计算变异系数CV。表2. 重复性检测结果(注:A:试剂盒中进口磁珠;B:BeaverBeads)
A | B | |||
TT3 | 高值 | 低值 | 高值 | 低值 |
1 | 667642 | 213385 | 693848 | 213664 |
2 | 677314 | 214545 | 667225 | 209190 |
3 | 680169 | 207648 | 676950 | 227223 |
4 | 683206 | 210096 | 680846 | 213436 |
5 | 679969 | 224507 | 672284 | 216808 |
6 | 681645 | 211581 | 691599 | 205937 |
7 | 669735 | 217214 | 670852 | 217858 |
8 | 683773 | 207312 | 679313 | 217009 |
9 | 669057 | 211634 | 662389 | 214115 |
10 | 674362 | 217370 | 667185 | 211032 |
CV | 0.90% | 2.43% | 1.55% | 2.78% |
实验结果显示,使用原试剂盒磁珠和BeaverBeads®磁珠对高、低两种不同的样本重复检测10次,CV值均小于3%无明显差异,符合行业标准YY/T 1222-2014小于8%的要求。
结论:使用原试剂盒磁珠和BeaverBeads®磁珠对高、低两种不同的样本重复检测10次,CV值无明显差异均小于5%,符合行业标准YY∕T 1223-2014要求(不大于8%)。相关磁珠产品推荐产品名称 | 货号 | 规格型号 |
链霉亲和素磁珠 | 22307 | 10 mg/mL, 1μm |
22308 | 10 mg/mL, 300nm | |
22309 | 10 mg/mL, 2.8μm |
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