在克隆一个基因后的下一步,往往是将其导入不同类型细胞,以分析其表达,测定表达对细胞生长的影响,或将高表达的基因产物纯化。将外源DNA导入哺乳动物细胞有两种途径:稳定(永久)或暂时性转染。稳定转染的目的是将转移基因整合到细胞染色体DNA上,形成稳定表达转移基因的细胞系。一般需要共转染一个选择标记,用于追踪转染成功的细胞或转染效率。...
T细胞的CRISPR编辑实验方案1.T细胞受体特异性gRNA设计在人体内,T细胞受体(TCR)由TRA和TRB基因分别编码的α链和β链组成。实验方案描述的TCR敲除应用数据,选择TCR α或β恒定区(TRAC或TRBC)内的两个靶点。化学合成的gRNA相比体外转录的mRNA细胞毒性更小,修饰后的RNA稳定性更高。...
本实验建立小鼠严重烫伤模型,通过采用慢病毒(购自上海吉凯基因公司)转染的方式稳定有效地下调了和上调了DC细胞中TIPE2表达,观察其对DC免疫功能的影响。该研究通过动物体内和体外实验旨在明确TIPE2对DC介导T淋巴细胞免疫抑制功能的影响,为寻求严重感染并发症的防治途径提供新思路。通过采用慢病毒(购自上海吉凯基因公司)转染的方式稳定有效地下调了和上调了DC细胞中TIPE2表达。...
常用的载体包括病毒载体和非病毒载体,病毒载体如逆转录病毒和慢病毒,逆转录病毒转染较稳定、效率高,如 Yescarta和Tecartus;慢病毒需大量质粒DNA进行瞬时转染,但安全性较高,如Kymriah。非病毒载体转染主要有基因编辑技术和电穿孔。...
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