探讨lncRNA--ZFAS1的扩增促进肝癌转移的机制

上一篇 / 下一篇 2017-11-12 16:09:31/ 个人分类：非编码RNA研究

　　参考文献：Zhecheng Z, Li T, Xie J, et al. Amplification of long non-coding RNA ZFAS1 promotesmetastasis in hepatocellular carcinoma[J]. Cancer research, 2015: canres. 3721.2014.
　　基本点：MS2蛋白是MS2噬菌体的包膜蛋白，可以与噬菌体复制酶的5′端由19个碱基组成的茎环序列特异地结合。

LncRNA--ZFAS1的扩增促进了肝癌细胞的转移机制探讨

　　利用GEO数据库及两种lncRNA芯片数据，筛选得到肝癌组织中58个lncRNA个上调的和3个lncRNA下调，通过建立共表达网络，确定了5个重要的lncRNA，其中上调最为明显的是ZFAS1。因此后续的研究重点是ZFAS1在肝癌细胞中的表达模式、临床意义、生物学功能。

文献中经典研究思路：（原谅我读的文献少，只是先解读了主要的研究思路。）
　　研究者对ZFAS1促进肝癌细胞转移的原因进行了探索。生物信息学分析表明，ZFAS1序列上有一个miR-150的结合位点，为了验证这个结合位点，研究者构建了一个融合MS2茎环结构（即MS2结合蛋白互作位点MS2bs）的特殊ZFAS1重组转录本，该转录本能与MS2bp和GFP形成一个复合体，利用GFP抗体进行RIP实验,对富集的miR-150进行qPCR验证。结果表明，携带有WT型miR-150结合位点的ZFAS1重组转录本可以明显富集miR-150，但mut型则无法富集miR-150。

　　研究者们利用生物素标记的特异ZFAS1探针进行的RNA pull down也进一步证实了ZFAS1与miR-150的特异性结合。

　　同时，也采用生物素标记的miR-150进行反向pull down，检测miR-150是否能拉下ZFAS1，结果表明只有WT型miR-150可以富集ZFAS1，mut型则无法富集ZFAS1，综合表明ZFAS1确实会作为一个ceRNA结合miR-150。

　　另外，研究者们也进一步证实，miR-150通过抑制内源ZEB1、MMP14、MMP16（肿瘤代谢中重要的调控因子）的表达减少细胞侵袭，ZFAS1通过影响miR-150对ZEB1、MMP14和MMP16三个基因的调控，造成三个基因表达上调，ZFAS1的沉默及过表达实验也证明了ZFAS1通过竞争性结合miR-150，正调控ZEB1、MMP14、MMP16这三个基因的表达。（相关实验设计和结果数据，能力、时间有限，后续再行补充更新该文章。）

　　本项研究发现了肝癌细胞侵袭及转移相关的一个重要lncRNA—ZFAS1，通过对ZFAS1在肝癌细胞中调控机制的进一步探索，结果表明ZFAS1通过影响miR-150调控肿瘤侵袭及转移，ZFAS1的过表达促进了肝癌细胞的侵袭和转移，为此，ZFAS1可能作为未来肝癌诊断及治疗靶点，便于开发新的治疗方法。

（索取文献&已解读过的朋友也可@qq3268908524互相交流。我也是可以从网站上下载文献的哦！文献中采用的RIP、RNA pull down都属于蛋白与核酸互作验证常用技术方法，用于拉下RNA、蛋白质，而拉下蛋白的后续实验目的通常聚焦到蛋白功能验证上，常用手段之一--蛋白质组学，那么下期再会：iTRAQ经典技术分享）

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